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面对C位担当CRISPR, RNAi难道只是配角?

 生物_医药_科研 2019-01-15

CRISPR自从它的诞生,就注定了其基因编辑领域的“C位”的身份:革命性的创新,突破种属局限(没有不能编辑的,只有你不敢编辑的),旷日持久的专利纠纷……


昔日红星RNAi难道就这样过气了?



但其实:2018年8月FDA批准上市用于治疗家族性淀粉样多发性神经病变(Familial Amyloidotic Polyneuropathy, FAP)的药物Patisiran就是基于siRNA哦;并且Patisiran已经是第8款小核酸类药物!


吃不吃惊,意不意外?


你可能不了解的是:


  • 早期大规模筛选,RNAi成本更经济;

  • 临床安全性上,RNAi的可控性更多被证实;


如何才能实现用最少量的 siRNA/ miRNA达到持续的基因抑制?

今天我们就来带你了解一下~


① 装备齐全很重要!实验前务必检查好所需试剂,才不会中途慌乱哦。

下图所示,即为RNAi转染高手的标准实验装备配搭(和你的雷同?仅为巧合)



格外不能忽略的是阴性对照和阳性对照的设计



② 确认细胞处于RNAi操作最佳的细胞汇合度为:60-80%;推荐量均基于24孔培养板




③ 准确配置siRNA工作液(Mixture A)和RNAiMAX转染试剂工作液(Mixture B)


④ 按体积比1:1均匀混合转染试剂工作液和siRNA工作液,37°C孵育5分钟;


⑤ 取50 μL混合液逐滴加入单个孔中,孵育1-3天后在显微镜下观察。根据阳性对照和阴性对照计算转染效率。



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