CRISPR自从它的诞生,就注定了其基因编辑领域的“C位”的身份:革命性的创新,突破种属局限(没有不能编辑的,只有你不敢编辑的),旷日持久的专利纠纷…… 昔日红星RNAi难道就这样过气了? ▼ 但其实:2018年8月FDA批准上市用于治疗家族性淀粉样多发性神经病变(Familial Amyloidotic Polyneuropathy, FAP)的药物Patisiran就是基于siRNA哦;并且Patisiran已经是第8款小核酸类药物! 吃不吃惊,意不意外? 你可能不了解的是:
如何才能实现用最少量的 siRNA/ miRNA达到持续的基因抑制? 今天我们就来带你了解一下~ ① 装备齐全很重要!实验前务必检查好所需试剂,才不会中途慌乱哦。 下图所示,即为RNAi转染高手的标准实验装备配搭(和你的雷同?仅为巧合) 格外不能忽略的是阴性对照和阳性对照的设计 ② 确认细胞处于RNAi操作最佳的细胞汇合度为:60-80%;推荐量均基于24孔培养板。 ③ 准确配置siRNA工作液(Mixture A)和RNAiMAX转染试剂工作液(Mixture B) ④ 按体积比1:1均匀混合转染试剂工作液和siRNA工作液,37°C孵育5分钟; ⑤ 取50 μL混合液逐滴加入单个孔中,孵育1-3天后在显微镜下观察。根据阳性对照和阴性对照计算转染效率。 ———————— |
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