细胞转染实验技术简介

细胞转染的方法主要包括：人工脂质体法、磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、电穿孔法、病毒转导法等，上期详解了细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和步骤 等，今天做个细胞转染技术大比拼，了解各种细胞转染的方法优缺点，再根据自己的实验要求选择理想的方法，获得漂亮的实验结果。

接下来，详述一下几种经典细胞转染的方法。

一、人工脂质体法

带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，进而可被细胞内吞稳定转染/瞬时性转染。这种方法几乎适用于所有细胞，转染效率高、重复型好，但转染时需要去除血清，转染效果随细胞类型变化大。

脂质体转染的原理与步骤：详情

二、磷酸钙法

通常穿了“隐身衣”核酸分子在“照妖镜”磷酸钙的作用下可形成“肉眼可见”的磷酸钙-DNA共沉淀，可使共沉淀中浓缩DNA分子与细胞表面结合并通过内吞作用进入细胞。该法可用于瞬时或稳定转染。然而因其对pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化十分敏感，所得结果容易出现差异，且对许多类型的细胞培养物(尤其是原代细胞)具有细胞毒性，转染效率较差。

三、DEAE-右旋糖苷法

常言道：同性相斥，异性相吸。因而，当带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸中带负电的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后会被细胞膜抱团相拥并通过细胞内吞作用迎客到家。该法可用于瞬时转染，操作相对简单、结果可重复，但是对细胞有一定的毒副作用，且转染时需要血清。

四、电穿孔法

有时，细胞有些“油盐不进”，就是不开放门户给核酸放行，此时各位小伙伴可采用一些强硬手段—电穿孔法。此法利用高脉冲电压破坏细胞膜电位，使得DNA 通过膜上形成的小孔导入稳定/瞬时性转染，适用于所有类型的细胞，但细胞致死率高，DNA和细胞用量大，且需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件。

其他物理基因输送法还包括基因枪、直接显微注射等方式。前者又称为粒子轰击，可将包裹着核酸的显微重金属颗粒告诉射入受体细胞内，适用于瞬时性转染。该技术可需要昂贵的设备，且细胞死亡率较高。而后者则是通过精细的注射针将核酸送入胞浆中，一次只能输送一个细胞中，适用于构建转基因动物或输送人工染色体。

五、病毒转导法

一般，病毒介导的转染也称之为转导，它为难以转染的细胞类型提供了一种方法，可用于蛋白质过表达或抑制，是临床研究中最常用的方法。它通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中，可用于难转染细胞、原代细胞的稳定性转染。

来源：每日生物评论