作者:解螺旋.子非鱼 如需转载请注明来源:解螺旋·医生科研助手 上周小鱼细述了影响细胞转染效率的三大重要因素(可查看《细胞转染率低?小心花样式“做死”!》的文章),然而仍有不少研究僧曾在这个坑中跌爬滚打,被摔的鼻青脸肿。说到底转染方法太过五花八门,让人眼花缭乱。那么为了平安度过这道坎儿,选择一个适合的细胞转染方法才是至关重要的。 众所周知,细胞转染技术主要分为三大类:化学法、物理法及生物学法。但是没有一种方法是放之四海而皆准的,即没有任何方法适用于所有细胞和所有实验。因而只有依据自己的实验要求选择理想的方法,才能获得漂亮的实验结果。 常言道:同性相斥,异性相吸。因而,当带正电的DEAE-右旋糖苷与核酸中带负电的磷酸骨架相遇,妥妥的火花四射,而后会被细胞膜抱团相拥并通过细胞内吞作用迎客到家。该法可用于瞬时转染,操作相对简单、结果可重复,但是对细胞有一定的毒副作用,且转染时需要血清。
通常穿了“隐身衣”核酸分子在“照妖镜”磷酸钙的作用下可形成“肉眼可见”的磷酸钙-DNA共沉淀,可使共沉淀中浓缩DNA分子与细胞表面结合并通过内吞作用进入细胞。该法可用于瞬时或稳定转染。然而因其对pH、温度和缓冲液盐浓度的微小变化十分敏感,所得结果容易出现差异,且对许多类型的细胞培养物(尤其是原代细胞)具有细胞毒性,转染效率较差。
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物,进而可被细胞内吞稳定转染/瞬时性转染。这种方法几乎适用于所有细胞,转染效率高、重复型好,但转染时需要去除血清,转染效果随细胞类型变化大。
其他物理基因输送法还包括基因枪、直接显微注射等方式。前者又称为粒子轰击,可将包裹着核酸的显微重金属颗粒告诉射入受体细胞内,适用于瞬时性转染。该技术可需要昂贵的设备,且细胞死亡率较高。而后者则是通过精细的注射针将核酸送入胞浆中,一次只能输送一个细胞中,适用于构建转基因动物或输送人工染色体。
一般,病毒介导的转染也称之为转导,它为难以转染的细胞类型提供了一种方法,可用于蛋白质过表达或抑制,是临床研究中最常用的方法。它通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中,可用于难转染细胞、原代细胞的稳定性转染。
|
|