|
细胞划痕是一种简单易行的检测细胞迁移的方法，实验成本低，操作方便，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。想必这些大家都很清楚，就不过多阐述，但是作为有多年经验的实验者，在这里也有一些小小的经验，望与大家分享： 1）划痕实验很重要的一个因素就是铺板量，不同细胞的大小不一样，铺板量不一样。就像786-O细胞比较大，96孔板一般铺2-3万细胞/每孔，第二天细胞融合度达到90%以上；而RKO细胞比较小，96孔板一般需要铺7-8万/每孔，第二天细胞融合度差不多达到90%左右。所以具体要根据细胞大小适当调整，细胞划痕铺板密度一般为70-90%之间。密度过低，增殖因素可能会影响迁移能力，反之，对于细胞状态会有影响，以至于不能保证实验的客观真实性。 2）细胞的贴壁能力也很重要。有的细胞贴的不牢，划痕之后不易清洗，只需轻轻换液即可；而有的细胞贴壁比较牢固，可以选择轻轻拍一下，洗去划掉的细胞再换液。 3）最后就是时间点。细胞划痕实验基本从8h，16h，24h，36h，48h这几个时间点间进行选择，但是具体进行的时间点需要根据细胞的迁移能力进行调整； 对于细胞的迁移而言，为了保证实验的客观真实性，需要我们对细胞的生长特性特别熟悉，可以先安排预实验，来确定正式实验的条件，以保证正式实验顺利的进行。 |
|
|
