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专利名称：复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法 技术领域： 本发明属于医药学，涉及一种中药，特别涉及一种复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法。 背景技术： 血液肿瘤(急、慢性白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合症等)是一组严重危害青少年健康的常见难治病。化疗及骨髓移植(BMT)的长期缓解率(CCR)仅分别为15-17％、50％，且毒副作用大，经费高昂，成为严重社会问题，近10年来急性白血病M3(亦称急性早幼粒细胞白血病，APL)的治疗有所改善，先后出现了维甲酸、三氧化二砷(亚砷酸)，前者虽完全缓解率(CR)可高达85％，但因其高耐药性和副作用而受限，CCR仅20％，亚砷酸CR可达88％，但CCR仍低(54％)，且毒副作用大，超过50％，若不及时处理常危及生命。 发明内容 本发明的目的在于克服化疗、维甲酸耐药而长期生存率低(20％)，氧化砷毒副作用大的缺陷，提供一种抗癌效率高，无毒，经济，方便的复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法。 1998年申请人经检索资料，发现砷元素本身无毒，与氧结合则形成三氧化二砷(As2O3)剧毒，与硫结合为硫化砷(AsS)则无毒或微毒，因此申请人瞄准AsS(雄黄、拉丁文Realgar)开展了制备及基础应用研究，对急性白血病M3CR26/28例(92.89％)，中位缓解期已3.6年，CCR24/26例(92.31％)，居世界高水平，且无明显毒副作用，门诊用药，经济(400-800元/月)、方便，对其它血液肿瘤及癌症亦有一定疗效，属于广谱抗癌药。其机理与调控基因、抑制肿瘤血管生成，进而促进癌细胞凋亡及分化而达到治愈的目的，属于选择性抗癌凋亡剂，为肿瘤治疗带来新途径。 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案是复方瑞尔康抗癌药物，其特点是，由纯化瑞尔康及甘草组成，其中纯化瑞尔康为50％～80％，甘草为20％～50％。 复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，包括以下步骤1.按上述配方取纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm；2.加入稀盐酸浸泡24h；3.将盐酸浸泡后的胶体化纯化瑞尔康用水进行冲洗，置入恒温干燥箱进行烘干，温度为48℃，时间24h～48h；4.对干燥后的胶体化纯化瑞尔康按配方加入甘草粉充分混合；5.对混合后的配料进行常规的灭菌；6.经灭菌后的材料装入胶囊即成。 本发明的复方瑞尔康抗癌药物有以下效果1.适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效。 2.选择性诱导瘤细胞凋亡，兼有轻度诱导分化，而对骨髓造血无抑制作用。 3.无交叉耐药性，对复发、难治APL亦有效。 4.诱导缓解率及长期缓解率均高达90％以上。 5.无DIC并发症，不引起严重出血。 6.可通过血脑屏障，不易并发中枢神经白血病。 7.毒副作用轻微，对症处理可缓解。 8.可门诊治疗，不需住院及化疗，痛苦少，经费低。 图1是本发明的复方瑞尔康抗癌药物制备工艺流程图。 具体实施例方式 以下结合发明人依照上述技术方案进行的药理、毒理、药效试验和作用机理，对本发明作进一步的详细说明。 一、药学研究1、方组复方瑞尔康由纯化瑞尔康(中药雄黄的拉丁文Realgar音译)及甘草(Glycyrrhixae)组成，其成分为瑞尔康50％～80％，甘草20％～50％，制成胶囊，瓶装0.25g/胶囊×40粒。 2、制备方法按本发明的上述制备方法进行。因雄黄难溶于水，吸收率极低(0.04％)，且含氧化砷5％-10％，制备目的使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm，便于吸收。为预防氧化砷中毒，通过酸洗水飞除去氧化砷。 3、成份分析及稳定性实验瑞尔康(Realgar)湖南产。 分子式AsS(硫化砷)(As4S4、As2S3)，分子量427.93，经X线衍射分析，1998、2000、2003年3次样检，其中1998年测定As4S493％、As2S33％；其他4％；2000年测定As4S493％、As2S32％；其他5％；2003年测定As4S492％、As2S32％；其他6％；保存5年性能稳定。 二、药理研究1、药效实验纯化瑞尔康711μg·L-1作用72小时，通过MTT检测，对各种瘤细胞的抑制率分别为急性早幼粒细胞白血病细胞(NB4)85％，耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞(MR2)69％，B细胞淋巴瘤细胞(Raji)79.34％；慢性粒细胞白血病细胞(K562)30.57％(2844μg·L-1为83.60％)；急性髓细胞白血病细胞(HL-60)26.25％(2844μg·L-1为77％)；T细胞淋巴瘤细胞(Jurkat)17.22％(2844μg·L-1为67％)(P＜0.01)，其效果依次为NB4＞Raji＞MR2＞K562＞HL-60＞Jurkat，当药量成倍加大后，其疗效亦成倍增加。 2、药代动力学研究纯化瑞尔康单次灌胃500mg·kg-1后很快吸收进入血液，4h达高峰，且在血液中消除较快，不存在蓄积倾向，属一室模型。吸收后迅速分布至肝、脾、肺、肾、胃肠壁、骨、皮肤、心、脑组织等，与胃肠组织亲和力量大，其次为肾、骨骼、肺、肝、皮肤，在骨骼、皮肤、脾、脑组织中浓度下降较慢，提示有蓄积可能，尿砷排泄量不足给药剂量的0.04％，表明瑞尔康进入血液的量较少，且吸收后主要经胃肠道排泄。 3、毒理研究纯化瑞尔康500mg·kg-1对小白鼠的LD50测定结果(Bliss法)半致死剂量(LD50)＝19.3262±1.0736g·kg-1，可信限区间为18.2825g·kg-1～20.4296g·kg-1。毒理学规定≥10g·kg-1为无毒制剂。 4、方解及作用机理研究瑞尔康(雄黄)为选择性诱导瘤细胞凋亡的抗癌主药，主要成份为硫化砷；甘草为辅，主要成份是甘草甜素，具有解毒、保肝、抗过敏等作用，二者相配，相辅相乘。 (1)LDH释放试验阴性对照、实验组和阳性对照经355μg·L-1瑞尔康处理24h，三组分别为69±2.7U·L-1、69±3.5U·L-1、282±7.2U·L-1，对NB4细胞膜完整性无影响(P＞0.05)，提示瑞尔康属非细胞毒作用。 (2)超微电镜和流式细胞仪(FCM)检测瑞尔康作用NB4、MR2细胞后，细胞核边集，浓缩，碎裂，新月体形成，呈典型凋亡状态。瑞尔康作用36h后，MR2细胞基因DNA电泳出现特征性凋亡梯带，而对照组无此现象；NB4细胞APO2.7蛋白表达率对照组为0.2％，355μg·L-1瑞尔康组为8.5％，提示凋亡作用。Annexin V-FITC/PI双标准检测NB4细胞中4区凋亡细胞比例显著增加，对照组为0.5％，加药组为10.4％，P＜0.005。细胞周期呈现各浓度瑞尔康作用NB4、MR2细胞24、36、60、72h后，均对细胞周期有影响，24h后G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，48h出现凋亡，且呈时间、剂量依赖性。 (3)透射电镜、分化抗原、NBT还原力检测证明瑞尔对NB4和MR2细胞兼有部分诱导分化作用，CD11b表达增加，NBT还原力增强，呈剂量依赖性。 (4)凋亡机理实验通过2048样点基因表达谱芯片检测，瑞尔康作用NB4细胞4h后，可使11条基因下调，2条基因上调；作用48h后，8条基因上调，33条基因下调，与细胞信号传递、蛋白翻译合成、DNA结合转录、血管生长等基因调控诱导癌细胞凋亡有关。 (5)抗凋亡基因检测对K562抑制率低(30.57％)的原因，经检测与bcl-XL抗凋亡基因高表达有关，转染反义RNA封闭bcl-XL抗凋亡基因表达后再用瑞尔康，则可提高其敏感性。 三、药物有效性及安全性观察1.临床资料对1998年3月至2003年4月随机接诊，经骨髓、组化、免疫分型、PCR确诊的急性白血病M3(APL)28例观察。男11例，女17例，平均年龄39(9～59)岁，初发21例，维甲酸耐药复发7例，急性早幼粒细胞白血病A型15例，急性早幼粒细胞白血病B型13例。 2.治疗方法诱导缓解成人，复方瑞尔康4.5g·d-1～6.0g·d-1，分3次餐后服用，直至完全缓解(CR)。 维持治疗成人，复方瑞尔康3.0g·d-1～4.5g·d-1，分3次餐后服用，维持5年。 3.结果28例APL经复方瑞尔康治疗30～60天，平均42天，缓解(CR)26/28例，占92.89％；未缓解(RN)2/28例，占7.11％。维持治疗0.5年～6年，平均为3.6年，复发2/26例，占7.69％，完全缓解(CCR)24/26例，占92.31％。治疗中ALT68U/L增高及皮肤色素沉着各1例，占3.5％。其余病例肝肾功、心电图均正常，无皮肤角化及脱色，未诱发DIC。通过原子吸收光谱监测患者血砷浓度，第3个月为3μg·L-1，1年6.3μg·L-1，均低于坤中毒的血砷浓度(0.1mg·L-1～10mg·L-1)。1例男性患者在服用复方瑞尔康5年时结婚，其爱人所生小孩健康无病，说明复方瑞尔康是一种安全、高效的抗癌药物。 另外，本组采用化疗间歇期服用复方瑞尔康，治疗多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、肾癌等疾病，亦有一定疗效。 复方瑞尔康治疗特点适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效，对急性白血病M3完全缓解率及长期缓解率均高达90％以上，可作为首选药物。可通过血脑屏障，不易并发中枢神经白血病。毒副作用轻微，不影响治疗。无DIC并发症，不引起严重出血。无交叉耐药性，对维甲酸耐药复发及难治性白血病M3亦有效。选择性诱导瘤细胞凋亡，兼有轻度诱导分化作用，对骨髓造血无抑制作用。可门诊治疗，不需住院及化疗，无痛苦，经费低。 下表是发明人给出的复方瑞尔康治疗APL疗效及其效果对照。 复方瑞尔康治疗APL疗效及其效果对照表 权利要求 1.一种复方瑞尔康抗癌药物，其特征在于，该复方瑞尔康抗癌药物由纯化瑞尔康及甘草组成，其配方为纯化瑞尔康50％～80％；甘草20％～50％；其中，纯化瑞尔康的分子式为硫化砷(AsS)92％～96％；其中As4S490％～93％；As2S32％～3％。 2.一种实现权利要求1所述的复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，包括以下步骤1)按配方取50％～80％的纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化，微粒直径＜20μm；2)加入稀盐酸浸泡24h；3)将盐酸浸泡后的胶体化纯化瑞尔康用水进行冲洗，置入恒温干燥箱进行烘干，温度为48℃，时间24h～48h；4)对干燥后的胶体化纯化瑞尔康按配方加入20％～50％的甘草粉充分混合；5)对混合后的配料进行常规的灭菌；6)经灭菌后的材料装入胶囊即成。 3.如权利要求2所述的复方瑞尔康抗癌药物的制备方法，其特征在于，所述的常规灭菌采用钴60照射。 全文摘要 本发明公开了一种复方瑞尔康抗癌药物及其制备方法，由纯化瑞尔康及甘草组成，其制备方法是将纯化瑞尔康通过胶体磨，使雄黄胶体化；加入稀盐酸浸泡后用水进行冲洗并干燥，加入甘草粉，进行灭菌；然后装入胶囊即成。本发明的复方瑞尔康治适应症广泛，对血液肿瘤及多种实体瘤均有效，对急性白血病M 文档编号A61P35/00GK1528362SQ03134628 公开日2004年9月15日 申请日期2003年9月29日 优先权日2003年9月29日 发明者刘陕西 申请人:西安交通大学 |
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