一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤的药物的制作方法

专利名称：一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤特别是前列腺癌的药物。具体地说，本发明涉及以龙葵、猪苓、莪术、女贞子、王不留行、补骨脂作为主要成分的治疗恶性肿瘤特别是治疗前列腺癌的药物。在本发明药物中，所述药物还可以与黄芪、何首乌、茯苓、夏枯草、穿山甲等药物中的任一或多个相结合。
背景技术：
肿瘤是机体中正常细胞，在不同的始动与促进因素长期作用下所产生的增生与异常分化所形成的新生物。新生物一旦形成，即逐步开始脱离病因因素和机体环境的控制而具有自主性生长特点，破坏正常组织和器官，尤其恶性肿瘤常可危及人类生命。目前恶性肿瘤是世界上造成人类死亡的重要原因，给人类生息繁衍构成巨大威胁。在近百年中，医学得到迅猛发展，部分肿瘤得到了有效的治疗，尤其是早期肿瘤，常可采取手术、放疗、化疗等方法，使肿瘤得到有效控制，甚至得到根治。但一旦肿瘤到了后期，常发生全身转移，各种疗法均难以奏效。中医药疗法，在我国具有数千年的临床实践经验，常可通过抑制肿瘤细胞生长、增强机体免疫力、改善生活质量、与化疗药起协同作用、减轻化疗放疗等治疗的副作用等而起到重要作用，为延长人类生命作出了贡献。因此，寻找治疗恶性肿瘤的有效中医药疗法，也是医学研究的重要领域。
例如，前列腺癌是西方国家的最常见恶性肿瘤，据美国2001年的统计资料，其在美国肿瘤患者中从1994年超过乳腺癌开始连续数年位居第一，每年约有180,000新发患者，并且其发病率还在世界范围内继续上升。虽然目前在包括中国在内的亚洲国家其发病率相对较低，但随着经济增长、工业化水平提高、饮食习惯改变等原因，中国等许多国家的前列腺癌发病率正逐年显著升高，越来越成为老年男性身体健康的大敌。
本病多发于中老年男性，与年龄成显著正相关，自超过40岁开始，其发病率开始呈现对数级增长，约为年龄增长的108倍。目前其病因尚不清楚，可能与基因遗传、饮食习惯、生活环境等有密切关系，目前尚无法实现一级或二级预防。
本病在临床上常分为四期A期，无临床症状的偶发癌；B期，为肿瘤局限于前列腺包膜内；C期，局部浸润，限于前列腺包膜外；D期，为伴有淋巴或骨转移。并且具有临床潜伏期长，早期诊断困难，后期难以根治等特点。
对于本病的治疗，主要根据临床分期不同而给予不同治疗方法，一般对于A、B期患者，可以首先采取手术疗法或粒子植入放疗法；而对于C、D期患者，由于手术疗法的局限、放疗和化疗的乏效，但根据其所独具的雄激素依赖特性而可采用内分泌疗法，又可称为去雄激素疗法——即为采用手术切除睾丸或采用化学药物如氟他胺等雄激素受体拮抗剂、LHRH受体激动剂、孕激素等，以达到去除体内雄激素作用的目的，而能达到很高的部分缓解率，取得较好的短期疗效。但自应用去雄激素疗法的几十年来，从未能达到根治本病的目的，大多数患者在实行去雄激素疗法后1～3年内，肿瘤转变成雄激素非依赖性而重新增长，并再难以用其他理想的治疗方法而获得良好控制。
尤其在我国，由于普遍性的缺少良好的保健网络，以及多数医务人员对前列腺癌认识上的局限，使得前列腺癌在临床上发现时，多数已经到了C、D期，早已失去手术根治机会，并且多数患者常很快进入雄激素非依赖性阶段而陷于困境。

发明内容
本发明的目的是提供一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤，特别是前列腺癌晚期的药物。
本发明药物，其治疗肿瘤的作用机理尚不清楚，主要可能是通过抑制肿瘤细胞DNA合成、使肿瘤细胞阻滞于S期、破坏了正常细胞周期、导致细胞走向死亡，从而起到抑制肿瘤细胞增殖而达到治疗目的。
在本发明的药物中，可用生药粉末，亦可用水或有机溶剂如不同浓度醇类(20％-100％)等溶剂的提取物，包括浓缩液、提取浸膏或提取物干粉，根据剂型的需要进行选择。对于药物优选提取物，莪术优选提取挥发油，猪苓、龙葵优选水提取液，补骨脂、王不留行、女贞子优选乙醇提取液。
各种药物可以采用常用的提取工艺制备，包括粉碎、提取、浓缩等工序，提取则可采用浸泡法、渗漉法或加热提取法等。提取液的浓缩则可采用常压蒸发或真空蒸发，得到提取浓缩液或提取浸膏后可直接使用，亦可进一步通过烘干干燥后制成提取物粉末应用，还可将提取液采用喷雾干燥法或冷冻干燥法制成提取物粉末使用。
在本发明的优选实施方案中原料为龙葵1～80份(重量计)优选10～40份猪苓1～70份(重量计)优选10～35份莪术1～60份(重量计)优选10～30份女贞子1～80份(重量计)优选10～40份王不留行1～60份(重量计)优选10～30份补骨脂1～60份(重量计)优选10～40份可以根据制备不同剂型的要求，调节上述各种药物的用量。
本发明的解决方案是基于中国传统医学对“前列腺癌”的认识。
前列腺癌多发于老年男性，其病因都为肝肾阴虚之质、阳气渐趋衰竭，且兼长期嗜食肥腻之物，易致湿热内生，趋于下焦，久化浊毒，瘀滞下窍；或兼纵欲不禁，相火亢旺，炼精成浊，瘀阻精道，久成癥结。治疗当以清化浊毒为先、祛瘀散结是主、补益肝肾为本。
本发明药物中龙葵味苦性寒，有清热解毒、活血消肿之功效；猪苓味甘淡性平，入脾肾膀胱经，有利尿渗湿、通利水道之功效；莪术性味苦辛温，入肝脾经，有行气破瘀、消积止痛、化聚消癥之功效；王不留行性味苦平，入肝胃经，取其活血消肿通经之功；女贞子，性味苦甘平，入肝肾经，有补肝肾、强腰膝、益气阴之功效；补骨脂，味辛性温，入肝肾经，有补肾助阳之功。各药物合而为一则合乎上述治则，能起到抑制肿瘤生长的作用。
在本发明药物中，还可以配以一种或多种辅助药物，包括苦参、黄芪、何首乌、茯苓、夏枯草、穿山甲等，优选黄芪、何首乌、穿山甲。
组方中黄芪具有益卫固表、利水消肿、托毒、生肌之功效，可用于治疗内伤老倦、破癥瘕积癖、及一切气衰血虚之证。何首乌有补肝、益肾、养血、祛风之功效，可用于消痈肿、疗风疮等。穿山甲有消肿溃痈、搜风活络、通经下乳之功效，可用于治疗痈疽疮毒、风寒湿痹等。
本发明药物中，黄芪、何首乌、穿山甲可用生药粉末，亦可用水或有机溶剂如不同浓度醇类(20％-100％)等溶剂的提取物，包括浓缩液、提取浸膏或提取物干粉，根据剂型的需要进行选择。
本发明中所述中药组分的粉末可以按一般的制药工艺制备，包括洗净、烘干、粉碎、过筛等步骤。
发明中所述中药组分的提取物可以采用常用的提取工艺制备，包括粉碎、提取、浓缩等工序，提取则可采用浸泡法、渗漉法或加热提取法等。提取液的浓缩则可采用常压蒸发或真空蒸发，得到提取浓缩液或提取浸膏后可直接使用，亦可进一步通过烘干干燥后制成提取物粉末应用，还可将提取液采用喷雾干燥法或冷冻干燥法制成提取物粉末使用。
在本发明药物的优选实施方案中，辅助药物的重量配比范围为黄芪1～100份(重量计)，优选10～40份何首乌1～90份(重量计)，优选10～30份穿山甲1～50份(重量计)，优选5～30份在本发明最优选的药物实施方案中，龙葵、莪术、猪苓、女贞子、王不留行、补骨脂最优选的重量配比为30∶15∶20∶15∶10∶10。
本发明药物可以制成多种剂型，包括口服液、冲剂、胶囊剂、片剂、滴丸剂、水蜜丸剂、浓缩丸、散剂、粉末剂等。根据剂型需要可配以不同的可药用载体，优选的载体是活性成分在其中溶解度较大的那些。最常用于本发明药剂的可药用载体是水、乙醇及其混合物，从而可将本发明药剂制成冲剂、胶囊剂、片剂、滴丸剂、水蜜丸剂、散剂、粉末剂。另外，这些还可以包括其他可药用载体等，它们可以是本领域技术人员已知的或显而易见的。
具体实施例方式制剂实施例实施例1、口服液的制备方法药物中各原料重量配比为猪苓30份，龙葵60份，女贞子60份，补骨脂30份，王不留行30份，莪术50份制法1.莪术提取挥发油。
2.将各药研粗粉，混合猪苓、龙葵、女贞子、补骨脂、王不留行及莪术残渣后用水提取，浓缩后成浓缩液。
3.将上述两者混合即可。
实施例2、粉末剂的制备方法药物中各原料重量配比为猪苓20份，龙葵30份，女贞子15份，补骨脂10份，王不留行10份，莪术15份制法1.猪苓、龙葵研粗粉，用水提取，浓缩至稠膏，烘干，研末。
2.女贞子、补骨脂、王不留行研粗粉，用70％乙醇提取，浓缩至稠膏，烘干，研末。
3.莪术蒸馏提取挥发油。
4.将两者混合后，喷上挥发油，β-环糊精包绕，密封包装。
实验研究摘要1药效学研究采用体内动物移植性肿瘤模型对本发明药物实施例2粗提物粉末进行抗肿瘤药效学观察，结果表明(1)将分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg剂量的粗提物粉末灌胃，发现对小鼠肝癌H22实体瘤、小鼠肉瘤S180实体瘤均有一定的抑瘤作用，并有体现出一定的量效关系；(2)并且当与环磷酰胺(CTX)合用时，对小鼠肉瘤S180实体瘤有协同抑瘤作用，并有一定的量效关系；(3)体外SRB法实验结果显示，本粗提物对多种肿瘤细胞株有生长抑制作用。(4)与CTX合用时，并不增加CTX的免疫抑制毒性，在大剂量时甚至有一定的减轻趋势。
2作用机理研究实施例2粉末，对PC-3M细胞株的DNA合成具有一定的时间和剂量依赖性抑制作用，对PC-3M细胞株的细胞周期也有一定的影响，能使细胞停留于S期，并呈现出一定的剂量依赖性。
3毒性研究实施例2粉末在用相当于生药约105g/kg体重灌胃小鼠时，没有发现显著的毒性。
药效学研究1实验材料1.1实施例2粗提物粉末，每14.5g药粉相当于100g生药，系自制，在阴凉干燥处保存。体内实验时用0.5％羧甲基纤维素钠(CMC)配成混悬液，供灌胃使用，现用现配。
1.2实施例2粗提物粉末当用于体外实验时，则按以下处理步骤(1)取50mg药粉溶于5ml 70％乙醇中；(2)密封后在37℃恒温摇床中震摇2小时；(3)随即以10,000g离心15min；(4)取上清夜用0.22μm滤膜过滤后分装于各冻存管中，密封贮存于-20℃，以此作为母液。每临用时，将此置于室温下复温20min后使用。
1.3注射用环磷酰胺，用生理盐水配成所需浓度。
1.4昆明种小鼠由中国医学科学院实验动物所繁育场提供。昆明种小鼠于中国医学科学院药物研究所二级动物房饲养。医学实验动物环境设施合格证书医动字第01-2089号。
1.5小鼠肝癌H22和小鼠肉瘤S180体内瘤株由中国医学科学院药物研究所药理一室传代保存。PC-3M，DU-145，TRAMP-C2，EJ细胞株则由北京大学泌尿外科研究所传代保存。
1.6RPMI1640培养基，胰酶，均为GIBCO产品；小牛血清，杭州四季青公司产品；乙酸，三氯乙酸，乙醇均为分析纯。
2方法与结果2.1实施例2粗提物粉末对小鼠肝癌H22生长的抑制作用2.1.1实验方法选用昆明种雄性小鼠50只，18-22g。将接种后的7天的荷瘤小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水1∶3稀释，于腋窝皮下接种瘤液0.2ml。接种后24小时，将动物随机分为5组，每组10只。设空白对照组，环磷酰胺阳性对照组，粗提物粉末分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg的高中低三个不同剂量治疗组。阴性对照组给予等体积0.5％CMC，环磷酰胺腹腔注射1次60mg/kg。粗提物灌胃给药，每日1次，连续给药5天，停药1次，再连续给药4天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价。并将结果进行统计学处理，采用非配对学生氏t检验。
疗效评价公式
2.1.2实验结果及结论第一批实验结果实施例2粉末相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg高中低三个剂量治疗组的抑瘤率分别为24.22％(p＝0.108)、41.35％(p＝0.007)、41.74％(p＝0.010)；第二批结果17.99％(p＝0.251)、20.33％(p＝0.203)、42.66％(p＝0.004)。(具体见表1)结果显示实施例2粉末灌胃给药能在相当程度上起到抑制小鼠肝癌H22生长的作用，并有较好的剂量效应关系。
表1 实施例2粉末灌胃给药对小鼠肝癌H22生长的抑制作用批 组别 剂量 用药 动物数 始体重 终体重抑制率 p值**瘤重(g，x数 次数 始/末 均(g) 均(g) (％)±s)1 阴性对照 10/10 21.526.4 2.40±0.88CTX 60mg/kg 1 10/10 21.526.2 0.75±0.14 68.940.000实施例2 3.6g/kg 9 10/10 21.325.3 1.82±0.53 24.220.108粉末(相 7.1g/kg 9 10/10 21.228.5 1.41±0.51 41.350.007当于生药 14.3g/kg9 10/10 21.026.5 1.40±0.42 41.740.010量)2 阴性对照 10/10 20.528.6 2.51±0.86CTX 60mg/kg 1 10/10 21.026.2 0.73±0.24 70.890.000实施例2 3.6g/kg 9 10/10 20.727.2 2.06±0.91 17.990.251粉末(相 7.1g/kg 9 10/10 20.828.9 2.00±0.94 20.330.203当于生药 14.3g/kg9 10/10 20.826.9 1.44±0.70 42.660.004量)*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为各组瘤重与阴性对照组对比的统计值。
2.2实施例2粗提物粉末对小鼠肉瘤S180生长的抑制作用2.2.1实验方法选用昆明种雄性小鼠50只，18-22g。将接种后的7天的荷瘤小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水1∶3稀释，于腋窝皮下接种瘤液0.2ml。接种后24小时，将动物随机分为5组，每组10只。设空白对照组，环磷酰胺阳性对照组，粗提物粉末分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg高中低三个不同剂量治疗组。阴性对照组给予等体积0.5％CMC，环磷酰胺腹腔注射1次60mg/kg。粗提物粉末灌胃给药，每日1次，连续给药5天，停药1次，再连续给药4天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价(公式见于上)。并将结果进行统计学处理，采用非配对学生氏t检验。
2.2.2实验结果及结论第一批实验结果实施例2粉末相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg高中低三个剂量治疗组的抑瘤率分别为22.43％(p＝0.205)、52.27％(p＝0.000)、27.52％(p＝0.037)；第二批结果44.93％(p＝0.000)、30.07％(p＝0.022)、38.80％(p＝0.002)。(具体见表2)结果显示实施例2粉末灌胃给药能在相当程度上起到抑制小鼠肉瘤S180生长的作用，但量效关系不够理想。
表2 实施例2粉末灌胃给药对小鼠肉瘤S180生长的抑制作用批 组别 剂量*用药次动物数始体重终体重 抑制率 p值**瘤重(g，x±数 数始/末 均(g) 均(g)(％)s)1阴性对照10/10 20.2 26.7 2.55±0.78CTX60mg/kg1 10/10 20.2 26.4 0.75±0.3170.76 0.000实施例23.6g/kg9 10/10 20.4 25.6 1.98±1.3122.43 0.205粉末(相7.1g/kg9 10/10 20.6 26.7 1.22±0.6852.27 0.000当于生药 14.3g/kg 9 10/10 20.6 27.4 1.85±0.7627.52 0.037量)2阴性对照10/10 21.5 28.5 2.11±0.48CTX60mg/kg1 10/10 21.1 28.4 0.57±0.3174.21 0.000实施例23.6g/kg9 10/10 21.2 29.1 1.22±0.3044.93 0.000粉末(相7.1g/kg9 10/10 21.1 26.8 1.55±0.6630.07 0.022当于生药 14.3g/kg 9 10/10 21.0 27.6 1.35±0.4838.80 0.002量)*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为各组瘤重与阴性对照组对比的统计值。
2.3实施例2粗提物粉末与环磷酰胺合用时对小鼠肉瘤S180生长的协同抑制作用2.3.1实验方法选用昆明种雄性小鼠80只，18-22g。将接种后的7天的荷瘤小鼠颈椎脱臼处死，在无菌条件下取出腹水，用生理盐水1∶3稀释，于腋窝皮下接种瘤液0.2ml。接种后24小时，将动物随机分为8组，每组10只。设空白对照组，环磷酰胺单用对照组，粗提物粉末分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg三个不同剂量单用治疗组，环磷酰胺合用粗提物分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg三个不同剂量联合治疗组。阴性对照组灌胃给予等体积0.5％CMC，环磷酰胺腹腔注射1次40-50mg/kg。粗提物灌胃给药，每日1次，连续给药5天，停药1次，再连续给药4天。末次给药后24小时，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、瘤重，计算肿瘤抑制率，进行疗效评价(公式见于上)。并将结果进行统计学处理，采用非配对学生氏t检验。
2.3.2实验结果及结论第一批实验结果CTX单用40mg/kg腹腔注射1次的抑瘤率为12.17％，实施例2粉末相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg高中低剂量单用治疗组的抑瘤率分别为36.71％、15.76％、28.27％，联合治疗组的抑瘤率分别为18.14％，27.95％，37.09％；第二批结果CTX单用50mg/kg腹腔注射1次的抑瘤率为54.06％，实施例2粉末单用组的抑瘤率分别为32.15％、45.45％、37.76％，联合治疗组的抑瘤率分别为69.70％，66.54％，65.99％。(具体见表3)结果显示实施例2粉末与CTX联合使用时能显著的抑制小鼠肉瘤S180生长，并比CTX或实施例2粉末单用时具有更明显的肿瘤生长抑制作用，且具有一定量效关系。
表3实施例2粉末灌胃给药与环磷酰胺合用时对小鼠肉瘤S180生长的协同抑制作用批组别 剂量*用药 动物数 始体重 终体重抑制率 p值**瘤重(g，x数 次数 始/末均(g) 均(g) (％)±s)1 阴性对照 10/1019.826.6 2.36±0.98CTX40mg/kg110/1019.627.5 2.08±0.74 12.17 0.487实施例23.6g/kg910/1019.728.0 1.50±0.86 36.71 0.062粉末 7.1g/kg910/1019.625.7 1.99±0.69 15.76 0.39414.3g/kg 910/1020.025.7 1.70±0.77 28.27 0.136CTX+实 40mg/kg+ 1+9 10/1020.124.4 1.94±0.89 18.14 0.345施例2粉3.6g/kg末联合组 40mg/kg+ 1+9 10/1020.325.7 1.70±0.66 27.95 0.1067.1g/kg40mg/kg+ 1+9 10/1020.326.3 1.49±1.52 37.09 0.02614.3g/kg2 阴性对照 10/1020.227.0 2.63±1.24CTX50mg/kg110/1020.225.1 1.21±0.32 54.06 0.002实施例23.6g/kg910/1019.825.6 1.78±0.86 32.15 0.082粉末 7.1g/kg910/1019.925.5 1.43±0.61 45.45 0.0114.3g/kg 910/1020.125.8 1.64±1.17 37.76 0.082CTX+实 50mg/kg+ 1+9 10/1020.023.9 0.80±0.24 69.70 0.000施例2粉3.6g/kg末联合组 50mg/kg+ 1+9 10/1020.023.8 0.88±0.24 66.54 0.0007.1g/kg50mg/kg+ 1+9 10/1020.024.9 1.89±0.34 65.99 0.00014.3g/kg*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为各组瘤重与阴性对照组对比的统计值。
2.4实施例2粗提物粉末与环磷酰胺合用时对小鼠免疫系统的影响2.4.1实验方法选用昆明种雄性小鼠50只，18-22g。将动物随机分为5组，每组10只。设空白对照组，环磷酰胺单用对照组，环磷酰胺合用粗提物粉末分别相当于生药3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg三个不同剂量联合治疗组。阴性对照组灌胃给予等体积0.5％CMC，每日1次，共10次；环磷酰胺于分组后第7天给予腹腔注射1次60mg/kg；粗提物粉末于分组后24小时开始灌胃给药，每日1次，连续给药10天。
分别于第1天、第10天，取小鼠尾静脉血计算白细胞数。并于第10天，颈椎脱臼处死动物，分别称体重、脾湿重、胸腺湿重，计算器官指数。并将结果进行统计学处理，采用非配对学生氏t检验。
2.4.2实验结果及结论CTX 60mg/kg腹腔注射1次，能使正常小鼠的白细胞显著下降，免疫器官重量及器官指数下降，体重与阴性对照组相比也有一定的减轻。实施例2粉末相当于生药量3.6g/kg、7.1g/kg、14.3g/kg三个不同剂量灌胃给药与CTX 60mg/kg合用时，各项指标基本无显著变化(均为p＞0.05)，但大中剂量时在各项指标上多数有改善趋势。(具体见表4，表5，表6，表7)表4 实施例2粉末灌冒给药与环磷酰胺合用时对正常小鼠体重的影响批数 组别 剂量*用药动物数 始体重 终体重p值**p值***次数始/末均(g)均(g)1 阴性对照 10/1019.2 27.5CTX60mg/kg1 10/1019.0 23.2 0.000CTX+实 60mg/kg+3.6g/kg1+9 10/1019.3 24.3 0.0010.098施例2粉60mg/kg+7.1g/kg1+9 10/1019.2 23.9 0.0000.299末 60mg/kg+14.3g/kg 1+9 10/1019.5 24.6 0.0030.0772 阴性对照 10/1020.5 28.6CTX60mg/kg1 10/1020.7 26.4 0.010CTX+实 60mg/kg+3.6g/kg1+9 10/1020.6 26.1 0.0290.757施例2粉60mg/kg+7.1g/kg1+9 10/1020.7 25.6 0.0010.356末 60mg/kg+14.3g/kg 1+9 10/1020.8 26.4 0.0091.000*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为与阴性对照组对比的统计值；
表5 实施例2粉末灌胃给药与环磷酰胺合用时对正常小鼠白细胞的影响批数组别剂量用药 白细胞数(给药 白细胞数(给药 P1值**P2值次数 前，×102) 后，×102)***1 阴性对照 87.1±13.2107.6±23.0CTX 60mg/kg 1 102.2±20.6 55.4±11.10.000CTX+实 60mg/kg 1+9 81.7±15.846.0±13.00.000 0.073施例2粉 +3.6g/kg末 60mg/kg 1+9 98.7±25.758.3±13.20.000 0.582+7.1g/kg60mg/kg+1+9 93.0±28.957.1±19.60.000 0.80414.3g/kg2 阴性对照 108.7±23.8 123.9±24.4CTX 60mg/kg 1 88.7±25.442.0±10.90.000CTX+实 60mg/kg 1+9 115.3±23.1 43.3±10.20.000 0.78施例2粉 +3.6g/kg末 60mg/kg 1+9 106.2±20.5 43.7±12.40.000 0.732+7.1g/kg60mg/kg 1+9 85.9±21.542.3±15.00.000 0.958+14.3g/kg*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为与阴性对照组对比的统计值；***为与CTX组对比的统计值。
表6 实施例2粉末灌胃给药与环磷酰胺合用时对正常小鼠脾脏的影响批数 组别剂量*用药次 脾湿重(mg)脾脏指数(mg/g)P1值**P2值数 ***1 阴性对照126.6±24.7 4.62±0.99CTX 60mg/kg 1 70.6±17.33.04±0.730.001CTX+实 60mg/kg 1+9 76.7±20.32.85±1.320.003 0.693施例2粉 +3.6g/kg末 60mg/kg 1+9 73.7±9.9 3.09±0.420.000 0.856+7.1g/kg60mg/kg+1+9 84.0±16.23.41±0.610.004 0.23014.3g/kg2 阴性对照132.7±24.0 5.34±1.15CTX 60mg/kg 1 112.2±56.4 3.76±1.11 0.002CTX+实 60mg/kg 1+9 124.6±35.2 3.66±1.31 0.001 0.831施例2粉 +3.6g/kg末 60mg/kg 1+9 136.6±37.8 3.59±1.08 0.000 0.750+7.1g/kg60mg/kg 1+9 133.6±35.1 3.96±1.14 0.004 0.510+14.3g/kg*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为与阴性对照组对比的统计值；***为与CTX组对比的统计值。
表7 实施例2粉末灌胃给药与环磷酰胺合用时对正常小鼠胸腺的影响批数 组别剂量*用药 胸腺湿重(mg)胸腺指数(mg/g)P1值**P2值次数***1 阴性对照153.9±121.5 5.82±5.26CTX 60mg/kg146.0±9.9 1.98±0.390.012CTX+实 60mg/kg1+9 47.4±17.8 1.95±0.740.013 0.830施例2粉 +3.6g/kg末(相当60mg/kg1+9 42.4±9.9 1.79±0.490.010 0.420+7.1g/kg于生药60mg/kg+ 1+9 66.5±68.6 2.72 ±2.87 0.063 0.364量)14.3g/kg阴性对 169.3±69.9 6.76±2.73CTX 60mg/kg143.2±30.1 1.84±0.520.000CTX+实 60mg/kg1+9 40.5±8.3 1.73±0.310.000 0.816施例2粉 +3.6g/kg末(相当60mg/kg1+9 33.9±7.7 1.55±0.320.000 0.530+7.1g/kg于生药60mg/kg1+9 39.0±7.8 1.63±0.340.000 0.667量)+14.3g/kg*实施例2粉末剂量均为相当于生药的剂量。
**为与阴性对照组对比的统计值；***为与CTX组对比的统计值。
2.5SRB法观察实施例2粉末对肿瘤细胞的体外生长抑制作用2.5.1实验方法(1)用胰酶消化处于对数生长期的肿瘤细胞，以含10％FBS的RPMI1640培养基配制细胞悬液，浓度为1×104/ml，于96孔板内接种此细胞悬液100μl(每孔含1000个细胞)，并另铺一96孔板作T0。24小时后用培养基配制中药复方921，设7个浓度(贮存母液稀释度)1∶5，1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，每组设3个平行孔，每孔加入含药培养基100μl；同时处理T0板，每孔加入50％三氯乙酸25μl(终浓度为10％)，并固定细胞于4℃。
(2)将96孔板置于37℃、5％培养箱中培养96小时后，每孔加入50％三氯乙酸50μl(终浓度为10％)，于4℃固定细胞1小时。
(3)随后弃去培养液，用去离子水洗5遍，室温空气干燥；再每孔加入0.4％SRB 100μl，室温染色10min；再用1％乙酸洗5遍，室温空气干燥；再于每孔加入10mM非缓冲Tris(pH＝10.5)150μl。
(4)振匀后于515nm检测吸光度。
(5)计算药物对细胞生长的抑制率，以药物稀释浓度对数值对抑制率作线性回归，得一直线方程，从中求出药物的半数生长抑制浓度(GI50)。

2.5.2实验结果及结论实施例2粉末溶液直接加药法对体外肿瘤细胞生长有一定程度的生长抑制作用。结果见下表。
表8 实施例2粉末溶液对肿瘤细胞的体外生长抑制作用(SRB法)细胞株种类 细胞株代号 GI50(稀释度)前列腺癌 PC-3M 1∶22.7～1∶15.1*DU-145 1∶41.2～1∶16*TRAMP-C21∶73.5～1∶25.8*PC-31∶25.7～1∶17.7*膀胱癌 EJ 1∶20.3～1∶14.2**为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
实施例2粉末抗肿瘤作用的初步机理探讨1对DNA生物大分子合成抑制实验1.1实验材料胰酶，小牛血清，RPMI1640培养基，细胞培养瓶，加样枪，实施例2粉末溶液，3H-dTR，96孔板，液闪检测仪，闪烁液。
1.2实验方法(1)用胰酶消化处于对数生长期的PC-3M肿瘤细胞，以含10％FBS的RPMI1640培养基配制细胞悬液，浓度为1×106/ml，接种入96孔板，每孔100μl。
(2)12小时后，加入含药培养基100μl，设三个不同浓度治疗组，使得最终浓度分别为1∶20、1∶10、1∶5三个不同稀释度浓度。
(3)分别于加药后13小时点和24小时点前4小时，分别加入3H-dTR 0.5μCi/孔。
(4)到时间点后，即弃去培基，用胰酶消化收集细胞至滤膜，烤干后置于闪烁液中过夜。
(5)用液闪仪检测每个样本的放射线强度，并计算结果。
1.3实验结果及结论921方对前列腺癌细胞株PC-3M的DNA合成有时间和剂量依赖性抑制作用，这可能是其体外抑制肿瘤细胞生长的可能作用机理之一。具体结果见下表。
表9 实施例2粉末溶液对PC-3M的DNA合成的抑制作用作用时间 1∶20*1∶10*1∶5*抑制率13小时22.8％ 38.1％ 40.6％24小时14.7％ 42.2％ 74.6％*为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞周期的影响2.1实验材料胰酶，小牛血清，RPMI1640培养基，细胞培养瓶，加样枪，实施例2粉末溶液，RNase，磷酸缓冲液(PBS)，PI，流式细胞仪。
2.2实验方法(1)用胰酶消化处于对数生长期的PC-3M肿瘤细胞，以含10％FBS的RPMI1640培养基配制细胞悬液，浓度为3×105/10ml/100ml培养瓶，共设4组对照组，高中低不同药物浓度组，每组8瓶共32瓶。24小时后加入药物母液，使成为3个浓度(贮存母液稀释度)1∶5、1∶10、1∶20。
(2)分别于加药后24、48、72、96小时，处理各时间点细胞，每组2瓶共8瓶。处理步骤如下A胰酶消化收集贴壁和悬浮细胞，1500rpm×10min，离心，去上清；B用4℃预冷1×PBS洗涤细胞，1500rpm×10min，离心，去上清；C用1ml 4℃预冷1×PBS溶解细胞，并加入70％乙醇5ml固定，过夜。
D1500rpm×10min，离心，去上清；E用5ml 4℃预冷1×PBS溶解细胞成悬液；F1500rpm×10min，离心，去上清；G将细胞团溶解于0.5ml染液中，染液组成PI(Propidium iodide)2μg/ml，RNase 1mg/ml，Glucose 1mg/ml，PBS 1ml。置于4℃暗处染色反应1小时；(3)上样检测300目筛过滤细胞悬液，上样进行流式细胞仪检测。
2.3实验结果及结论实施例2粉末溶液直接加药法，具有剂量依赖性的增加PC-3M细胞S期比例，在大剂量(1∶5)时，甚至使得G2/M期细胞缺失，使得细胞完全阻滞在S期。
表10 实施例2粉末溶液作用24小时时PC-3M细胞周期的影响作用时间 分组 G0/G1(％) S(％) G2/M(％)24hr Control63.6029.60 6.801∶20*50.9140.07 9.031∶10*43.9049.30 6.801∶5*34.9060.00 5.10*为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
表11 实施例2粉末溶液作用48小时时对PC-3M细胞周期的影响作用时间 分组 G0/G1(％) S(％) G2/M(％)48hr Control62.2023.90 13.901∶20*47.9539.25 12.851∶10*51.2537.35 11.401∶5*72.1025.85 2.05*为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
表12 实施例2粉末溶液作用72小时时对PC-3M细胞周期的影响作用时间 分组 G0/G1(％)S(％) G2/M(％)72hr Control54.9923.13 21.881∶20*51.1537.00 11.851∶10*50.7542.80 6.401∶5*31.4068.60 0.00*为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
表13 实施例2粉末溶液作用96小时时对PC-3M细胞周期的影响作用时间 分组G0/G1 (％) S(％) G2/M(％)96hr Control 52.8126.66 20.531∶20*39.9534.62 25.431∶10*32.4936.15 31.351∶5*37.7462.29 0.00*为实施例2粉末母液在培养液中的最终稀释浓度。
3毒性研究3.1实施例2粉末急性毒性研究3.1.1实验材料昆明种小鼠20只，雌雄兼备，实施例2粉末，0.5％CMC。
3.1.2实验方法给小鼠灌胃给予实施例2粉末，灌胃剂量为15g/kg体重，相当于生药约105g/kg体重，灌胃体积0.5ml/20g。给药后观察7天，记录小鼠各种异常症状及死亡情况，并解剖肉眼观察各主要脏器的病变情况。
3.1.3实验结果及结论在此浓度下，药物外观为极粘稠液体近乎固体，为可灌胃的最大浓度。小鼠在实验期间，其一般行为、毛发色泽、饮食体重均无明显影响，并无任一小鼠死亡。解剖后各脏器也无明显病变。
权利要求
1.一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤的药物，其特征在于它基本上是由下述重量配比的原料和可药用载体制成的龙葵 1～80份猪苓 1～70份莪术 1～60份女贞子 1～80份王不留行 1～60份补骨脂 1～60份。
2.根据权利要求1所述的药物，其中所述原料重量配比范围是龙葵 10～40份猪苓 10～35份莪术 10～30份女贞子 10～40份王不留行 10～30份补骨脂 10～40份。
3.根据权利要求1和2所述的药物，其特征在于龙葵、猪苓用水提取，女贞子、补骨脂、王不留行用20％～100％乙醇提取，莪术蒸馏提取挥发油。
4.根据权利要求2所述的药物，其中所述原料的重量配比依次为30份、15份、20份、15份、10份、10份。
5.权利要求1-3任一所述的药物，其特征在于所述的原料药物还可以含有以下一种或多种组分黄芪1～100份、何首乌1～90份、穿山甲1～50份。
6.权利要求5的药物，其特征在于所述的原料药物的重量配比范围为黄芪10～40份、何首乌10～30份、穿山甲5～30份。
7.权利要求1-6中任一项所述的药物，其特征在于所述药物可被制成各种常用口服剂型，所述剂型包括口服液、冲剂、胶囊剂、片剂、滴丸剂、水蜜丸剂、浓缩丸、散剂、粉末剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗前列腺癌、肝癌、肉瘤等恶性肿瘤特别是前列腺癌的药物。具体地说，本发明涉及以龙葵、猪苓、莪术、女贞子、王不留行、补骨脂作为主要成分的治疗恶性肿瘤特别是治疗前列腺癌的药物。在本发明药物中，所述药物还可以与黄芪、何首乌、茯苓、夏枯草、穿山甲等药物中的任一或多个相结合。
文档编号A61P35/00GK1535699SQ0310919
公开日2004年10月13日 申请日期2003年4月7日 优先权日2003年4月7日
发明者郭应禄, 厉将斌, 叶祖光 申请人:郭应禄, 厉将斌, 叶祖光