治疗慢性咽炎、抗过敏的药物及其制备方法

专利名称：治疗慢性咽炎、抗过敏的药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗慢性咽炎、抗过敏的药物；本发明还涉及该治疗慢性咽炎、抗过敏的药物的制备方法。
背景技术：
现有技术中治疗慢性咽炎的中药有很多，例如，中国专利申请CN1135908A于1996年11月20日公开的一种治疗急性、慢性咽炎病症的药食两用中成药音咽灵。该药由罗汉果、青果、余甘子、红花、菊花、马齿苋、薄荷、西瓜翠、甜杏仁、桔梗、沙棘、山楂、紫苏、桔梗、甘草、乌梅、百合、五味子，莲子、酸枣仁、陈皮、龙眼肉，枸杞，桑葚、苡仁、香掾、黑芝麻、决明子、山药、莱菔子、大枣、冰糖多种药食两用中草药组合而成，可以制成片剂、丸剂、冲剂、茶剂、膏剂、散剂、胶囊、糕剂等多种剂型。中国专利申请CN1142377A于1997年02月12日公开的一种治疗慢性咽炎的中药组合物，所含组分及其重量百分比组成为天冬10～25，麦冬5～15，北沙参5～15，玉竹5～15，金银花5～15，甘草1～10，野菊花5～15，陈皮1～10，胖大海10～25；中国专利申请CN1348808A于2002年05月15日公开的一种治疗慢性咽炎的药剂涉及一种治疗慢性咽炎的中药制剂。主要是为解决现有的治疗慢性咽炎的药剂有效率低，易复发等问题而研制的；原料中包括生地、玄参、麦冬、甘草、贝母、白勺、薄荷、半枝莲、丹皮、茯苓、蝉蜕、木蝴堞、厚朴、石斛。中国专利申请CN1602946A于2005年04月06日公开的一种治疗急慢性咽炎及口腔炎症的口含片，包括由下列原料制得的活性成分和/或药学上可接受的附加剂麦冬30-80重量份，玄参30-80重量份，瓜蒌皮30-80重量份，诃子肉30-80重量份，青果15-35重量份，凤凰衣3-8重量份，桔梗60-160重量份，浙贝母60-160重量份，茯苓30-80重量份，甘草60-160重量份，蔗糖粉250-350重量份，白糊精380-460重量份，硬脂酸镁5-15重量份，以上原料共制成口含片1000片。
上述公开文献中均采用的复方，尚未见单味药或一个植物品种作为治疗慢性咽炎药物的文献公开。
一口盅又叫一口钟，是一味民间用的草药，其功效为退热、抗菌、抗病毒、消炎等，主要用于治疗感冒、胆囊炎(中国专利CN93111684.8)、胃及十二指肠溃疡(中国专利CN02138751.6)、风湿性关节炎(中国专利CN03125238.9)等。上世纪60年代乡村缺药，许多医院、卫生院、中小学都曾用一口盅煮水内服治疗流行性感冒以及流行性脑炎，起到了较好的效果。文献中尚无一口盅用于治疗慢性咽炎和具有抗过敏作用的报道。

发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明要解决的技术问题是提出一种和现有复方疗效相当的治疗慢性咽炎、抗过敏的单味药。
本发明解决其技术问题而采用的技术方案是基于发明人发现了一口盅具有治疗慢性咽炎的医疗作用和具有良好的抗过敏作用。本发明提出的治疗慢性咽炎、抗过敏药物是由一口盅为原料制备而成的药剂，该药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
作为本发明的优选技术方案，上述药剂优选为汤剂或挥发油。
将上述原料药制成本发明药物的生产方法是称取一口盅生药，加10倍量水浸泡，煮沸1小时，过滤；向药渣中加入8倍量水，复煎40min，过滤；合并两次滤液，浓缩，制得汤剂。将上述汤剂浓缩至半稠状后干燥，制得浸膏剂。
本发明根据慢性咽炎的药效学研究的指导原则，观察了一口盅水煎液及挥发油对慢性咽炎药效学指标的作用。结果证明一口盅具抑制大鼠肉芽增生的作用，但效果不如阳性对照药糖皮质激素可的松强，由于可的松长期应用的毒副作用，一口盅的作用是不可忽视的。应用角叉菜胶造成大鼠足跖肿胀后，观察到一口盅具有显著的抑制足跖肿胀的作用，尽管作用略逊于阳性对照药阿司匹林，但副作用远较阿司匹林为轻。祛痰试验证明一口盅的作用非常之强，远胜于阳性对照药氯化铵。大鼠同种被动皮肤过敏试验法(PCA)证明一口盅能够显著抑制经抗血清接种及抗原攻击后的大鼠皮肤通透性明显增加，说明其有良好的抗过敏作用。急性毒性试验表明无法药物测出LD50。根据药物的急性毒性试验方法，采用最大耐受量测定方法，计算得出一口盅水煎液的最大耐受量相当于人临床用量的800倍，挥发油相当于人临床用量的1000倍，结果表明一口盅水煎液提取物和挥发油无明显毒性，临床安全可靠。当用药量达到1000g/kg，仍不能测出一口盅水煎液及挥发油的毒性作用，说明其最大耐受性超过实验用药100倍，提示该药基本无毒性作用。以上结果证明了一口盅是一味毒性小、综合作用较强的治疗慢性咽炎、抗过敏的潜在新型药物。


图1是一口盅水煎液及挥发油对大鼠肉芽增生的影响效果图。
图2是一口盅水煎液及挥发油对角叉菜胶所致大鼠足跖炎症的影响效果图。
图3是一口盅水煎液及挥发油对小鼠气管段酚红排泌量的影响效果图。
图4是一口盅水煎液及挥发油对大鼠PCA的抑制作用效果图。
具体实施例方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步描述。
实施例1(一口盅水煎液提取)称取一口盅生药400g，加4000ml水浸泡30min，煮沸1小时(沸腾后开始计时)，滤过滤液备用；再向药渣中加入3200ml水复煎40min，滤过，两次滤液合并，浓缩。另取生药450g，加4500ml水浸泡30min，煮沸1小时(沸腾后开始计时)，滤过滤液备用；再向药渣中加入3600ml水复煎40min，滤过，两次滤液合并，浓缩。然后将四次滤液合并放入铝锅中加热浓缩至一定稠度，再转入小的不锈钢盘中，置于微波炉内(50℃)浓缩至半稠状。将药盘放入真空干燥箱中干燥(70℃)3.5小时，最后得净膏167.6g，得率为19.7％。
实施例2(一口盅挥发油提取)将900g一口盅生药分4次投入挥发油提取器提取，最后合并四次得油，共48ml，得油率5.33％。
药效学试验在民间，一口盅人的用药剂量一般为3g/60kg体重，即50mg/kg，大鼠的剂量为人的6倍，即300mg/kg，小鼠的剂量为人的8倍，即400mg/kg，以此剂量设定为本实验中实验动物的中剂量，在此基础上，增加3倍作为大剂量，减少3倍作为小剂量。根据一口盅水煎液和挥发油得率，换算成实验的用药剂量。
1.抗炎试验1.1抑制肉芽肿形成实验大鼠棉球植入法选取体重为200g左右的Wistar大鼠80只，雌雄各半，2％戊巴比妥钠麻醉，背部剃毛并用70％酒精消毒，在腰部做一切口，用钝性镊子由切口处向上做一皮下通道，将消毒棉球植入两侧的肩胛骨皮下部位(左右侧前肢腋下)。所选的棉球为20mg的标准棉球，术后当天开始给药，一口盅组灌胃给予一口盅水煎液，一口盅挥发油组灌胃给予一口盅挥发油，模型组给予2ml的0.5％CMC，可的松组肌注给药，连续9天，第十天脱臼处死大鼠，取出棉球，剥离肉芽肿组织。70℃烘4小时，称重，减去棉球重即为肉芽肿重量。
随机分为8组，每组雌雄各半，1.对照组；2.可的松组(25mg/kg/day)；3.一口盅小剂量组(20mg/kg/day)；4.一口盅中剂量组(60mg/kg/day)；5.一口盅大剂量组(180mg/kg/day)；6.一口盅挥发油小剂量组(5mg/kg/day)；7.一口盅挥发油中剂量组(15mg/kg/day)；8.一口盅挥发油大剂量组(45mg/kg/day)。上述药物所灌胃的容积同模型组(2ml)。
1.2大鼠足跖角叉菜胶致炎试验选取体重为200g左右的Wistar大鼠80只，随机分为8组，每组雌雄各半，1.对照组(蒸馏水2ml)；2.阿司匹林组(300mg/kg/day)；3.一口盅小剂量组(20mg/kg/day)；4.一口盅中剂量组(60mg/kg/day)；5.一口盅大剂量组(180mg/kg/day)；6.一口盅挥发油小剂量组(5mg/kg/day)；7.一口盅挥发油中剂量组(15mg/kg/day)；8.一口盅挥发油大剂量组(45mg/kg/day)。每日灌胃给药1次，连续9天，末次给药30min后，向大鼠左后足垫部皮下注射0.8％角叉菜胶0.1ml致炎。用YLS-7A足跖容积测量仪(山东医学科学院设备站)分别测定致炎前及致炎后的1h、2h、3h、5h大鼠足跖肿胀的容积，其差值为肿胀度(ml)，比较各组肿胀度的差异(注测定大鼠足跖容积前用记号笔在足跖处作一标记，以后每次均以该标记为准)。
2.祛痰(用酚红呼吸道排泌实验观察一口盅水煎液及挥发油对小鼠的祛痰作用)取昆明种小鼠120只(18-22g)雌雄各半，随机分成8组，每组15只(每组♀8、♂7或♀7、♂8)编号称重并记录1)模型组；2)氯化铵组(1000mg/kg)；3)一口盅小剂量组(26.7mg/kg)；4)一口盅中剂量组(80mg/kg)；5)一口盅大剂量组(240mg/kg)；6)一口盅挥发油小剂量组(6.67mg/kg)；7)一口盅挥发油中剂量组(20mg/kg)；8)一口盅挥发油大剂量组(60mg/kg)。用小鼠气管段酚红排泄法观察祛痰作用。实验前禁食不禁水12小时，给药30分钟后，分别以5mg/10g体重(2.5％溶液0.2ml/10g)计算，腹腔内注入酚红液，注射酚红液后30分钟处死动物。剪下甲状软骨下至气管分叉处的该段气管，放入盛有2ml生理盐水的试管中，震荡后静置过夜。取出试管内的气管，用离心法除去液体中的悬浮物，取得上清液1.5ml，再加1mol/l氢氧化钠0.05ml，应用Spectra max@190酶标仪(美国Molecular Devices公司)，在546nm波长处测定OD值。用已知浓度酚红液作一标准曲线。根据曲线计算酚红含量(g/ml)。
附实验前的准备
●2.5％酚红溶液准确称取酚红2.5克，用1mol/L NaOH溶液2.5ml溶解，加生理盐水至100ml，摇匀即得。
●标准酚红液的配制取6mg/ml的酚红液用生理盐水稀释成1000μg/ml，然后依次稀释成每毫升含酚红1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、6μg、7μg、8μg、9μg、10μg的标准管，每管3ml另每管各加10％氢氧化钠溶液2滴，密封备用。
●实验器材离心机、Spectra max@190酶标仪、小鼠灌胃器、手术剪、镊子、试管、注射器等。
3.过敏实验——大鼠同种被动皮肤过敏试验法(PCA)3.1抗血清的制备取150g左右的Wistar大鼠70只，雌雄各半，另取200g左右雄性Wistar大鼠6只，随即分成7组(每组包括雌雄各5只)1.对照组；2.一口盅小剂量组(20mg/kg/d)；3.一口盅中剂量组(60mg/kg/day)；4.一口盅大剂量组(180mg/kg/day)；5.一口盅挥发油小剂量组(5mg/kg/day)；6.一口盅挥发油中剂量组(15mg/kg/day)；7.一口盅挥发油大剂量组(45mg/kg/day)。
将天花粉以6％氢氧化铝凝胶配成2.5mg/ml的抗原混悬液，每一脚掌注射0.1ml，每鼠共注射0.4ml(即天花粉1mg)，注射后12天，腹主动脉采血，静置2小时以上，3500rpm离心15min取抗血清，稀释比例为1∶10，置-4℃以下备用。
3.2抗血清接种及抗原攻击另取150g正常Wistar大鼠，戊巴比妥钠麻醉下背部剃毛，背中线两侧各2点皮下注射上述抗血清0.1ml，48小时后进行抗原攻击，即静脉注射天花粉10mg/kg(用1％伊文思蓝配成1mg/ml)，30min后，断头处死动物，翻转背部皮肤，测量并记录蓝色反应斑直径大小，或剪下蓝斑皮肤，剪碎，置于含6ml丙酮-生理盐水(7∶3)的带塞离心管中，充分摇匀，浸泡48h，离心，取上清液，在610nm波长处测定光密度(OD)。于进行抗原攻击前30min灌胃给药。计算给药组对PCA反应的抑制百分率，其计算公式如下抑制百分率＝(对照组蓝斑光密度-用药组蓝斑光密度)÷对照组蓝斑光密度×100％注意1.抗血清的稀释比例为1∶16-1∶40，严格讲应根据抗血清的滴度进行合适的稀释。
2.抗原攻击至断头处死动物的时间一定要准确无误，否则将影响结果的正确性。
4.急性毒性实验预实验表明不能测出一口盅水煎液及挥发油的急性毒性，改作最大耐受量实验。
4.1实验准备●动物昆明种小鼠40只，18~22g，雌雄各半。注射器及针头，铁丝笼。
●药物一口盅水煎液及挥发油提取物，苦味酸溶液，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，吐温80。
配制方法1)0.5g CMC-Na溶于100ml水，制成0.5％CMC-Na。
2)4g水煎液提取物混悬于0.5％CMC-Na(20ml)，制成200mg/ml。(剂量为0.2ml/10g，浓度为200mg/ml，给药剂量为8g/kg)3)挥发油∶吐温80∶水＝1∶1∶8，配成乳化剂，稀释成62mg/ml。(剂量为0.2ml/10g，浓度为62mg/ml，给药剂量为2.5g/kg)4.2实验方法●取18~22g昆明种小鼠(雌雄各半)40只，禁食不禁水12小时。
●于次日口服给予200mg/ml一口盅水煎液提取物的0.5％CMC-Na混悬液，给药量为0.2ml/10g，一日两次，间隔4小时(禁食)，总剂量为8g/kg。共20只动物(雌雄各半)。
●给药后七日内观察动物行为活动、状态、死亡情况等，每日予以纪录。
饲养环境上海中医药大学清洁级动物饲养室，温度为25℃，相对湿度30％~70％。饲养和饮用水，分笼饲养，每笼为同性动物5只。
●给予水煎液提取物之同一天，另取20只(雌雄各半)给予一口盅挥发油0.2ml/10g，一日两次，间隔4小时(禁食)，总剂量为2.5g/kg。给药后观察内容同水煎液组。
5.统计学处理全部实验结果均以均数±标准差(X±SD)表示。用Student-t检验比较两组间数据的显著性差异，P＜0.05表示具有统计学意义。
三、实验结果1.一口盅对大鼠肉芽增生的抑制作用根据表1和图1的结果可见应用棉球植入法造成的肉芽肿的重量为173.2±5.284mg，应用可的松后，肉芽肿的重量明显减轻，与模型组比较，其抑制率为77.4％，差异相当显著(P＜0.001)。一口盅的水提物和挥发油均有抑制通过棉球植入法造成的肉芽肿的作用，二者的作用强度基本相等，应存在剂量-效应关系。但一口盅的作用与可的松比较，明显弱于可的松，说明尽管一口盅具有抑制肉芽增生的作用，但效果远不如糖皮质激素。
表1.一口盅水煎液及挥发油对大鼠肉芽增生的影响(n＝10)

与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.0012.一口盅对角叉菜胶所致大鼠足跖炎症的作用根据表2和图2的结果可见应用角叉菜胶造成大鼠足跖炎症反应，致炎后的足跖肿胀，随着时间的延长而增加，至3小时时，达到最高峰，随后，逐渐下降。应用抗炎药阿司匹林能够明显地抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，在致炎后的第1小时，与模型组比较，无显著性差异，但从第2小时直至实验末(5小时)，足跖肿胀的程度，时间依赖性地下降，与模型组比较，存在明显差异。应用一口盅的水提物和挥发油后，足跖肿胀的减轻情况，类似于阿司匹林，但作用稍弱于阿司匹林，尽管存在剂量-效应关系，但不显著。
表2.一口盅水煎液及挥发油对角叉菜胶所致大鼠足跖炎症的影响(n＝10)

与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.013.一口盅对小鼠气管段酚红排泌量的影响表3和图3的结果说明模型组小鼠的酚红含量为2.320±0.546μg/ml，应用氯化铵后，小鼠气管段酚红排泌量增加，与模型组比较，存在显著性差异(P＜0.01)。应用一口盅的水提物和挥发油后，小鼠气管段酚红排泌量明显增加，呈现剂量依赖性作用，在大剂量时，无论是水提物还是挥发油，其作用明显优于氯化铵。
表3.一口盅水煎液及挥发油对小鼠气管段酚红排泌量的影响(n＝15)


与模型组比较*P＜0.014.一口盅对大鼠同种被动皮肤过敏试验法(PCA)的抑制作用表4和图4的结果说明经抗血清接种及抗原攻击后的大鼠皮肤通透性明显增加，所测的光密度为0.406±0.062(0D)，应用一口盅的水提物和挥发油后，所测的光密度，呈剂量依赖性下降，水提物的作用略优于挥发油。水提物在中剂量和大剂量、挥发油在大剂量与模型组比较，具有显著性差异(P＜0.05)。
表4.一口盅水煎液及挥发油对大鼠PCA的抑制作用(n＝10)

与模型组比较*P＜0.05表5.一口盅水煎液对雄性大鼠急性毒性作用的观察(n＝10)

5.一口盅水前液对大鼠急性毒性的影响7日内，未发现小鼠出现异常毒性症状，其行为、活动、呼吸、排泄等生理特征正常，饮食和体重变化均在正常范围内。表5、表6、表7、表8的结果表明一口盅水煎液和挥发油不影响所列的一系列观察指标，均是阴性结果。
一口盅水煎液提取物的小鼠口服最大耐受量为8g/kg，计算得一口盅水煎液的一日最大耐受量相当于人临床用量的800倍。
一口盅挥发油的小鼠口服最大耐受量为2.5g/kg，计算得一口盅挥发油的一日最大耐受量相当于人临床用量的1000倍。
表6.一口盅水煎液对雌性大鼠急性毒性作用的观察(n＝10)

表7.一口盅挥发油对雄性大鼠急性毒性作用的观察(n＝10)


表8.一口盅挥发油对雌性大鼠急性毒性作用的观察(n＝10)

权利要求
1.一种治疗慢性咽炎、抗过敏的药物，其特征在于它是由一口盅为原料制备而成的药剂。
2.根据权利要求1所述的治疗慢性咽炎、抗过敏的药物，其特征是所述药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
3.根据权利要求2所述的治疗慢性咽炎、抗过敏的药物，其特征是所述药剂为汤剂。
4.根据权利要求2所述的治疗慢性咽炎、抗过敏的药物，其特征是所述药剂为挥发油。
5.权利要求3所述治疗慢性咽炎、抗过敏的药物的制备方法，其特征是称取一口盅生药，加10倍量水浸泡，煮沸1小时，过滤；向药渣中加入8倍量水，复煎40min，过滤；合并两次滤液，浓缩，制得汤剂。
6.权利要求4所述治疗慢性咽炎、抗过敏的药物的制备方法，其特征是将一口盅生药投入挥发油提取器提取，制得挥发油。
全文摘要
本发明涉及一种治疗慢性咽炎、抗过敏的药物。该药物是由一种天然植物一口盅为原料制备而成的药剂，该药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。本发明药物治疗慢性咽炎毒性小，综合作用较强，并且具有良好的抗过敏作用。另外，本发明还公开了该治疗慢性咽炎、抗过敏的药物的制备方法。
文档编号A61P11/04GK1957959SQ200510110009
公开日2007年5月9日 申请日期2005年11月3日 优先权日2005年11月3日
发明者宋晓亭, 牛尚文, 吴大正 申请人:宋晓亭, 牛尚文