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文献来源：Anal BioanalChem DOI 10.1007/s00216-016-9536-6 技术问题: 靶基因的重测序，抑或SNP位点高通量的基因分型，相对于传统的方法而言，使科学家节省了大量的时间与经费，一般的策略是先获得多重PCR产物，而后进行建库。市面上，有各种商业化的多重PCR引物合成优化试剂盒与建库试剂盒,但价格极其昂贵。为此，上海翼和应用生物技术有限公司与大学合作开发了多重PCR与建库方案。 摘要：本研究使用了三轮PCR的方式，迅速完成了37重PCR，并对757个样本进行了基因分型。通过经典的LDR方案验证后，99.5%的基因分型与其是一致的。 下面我们来看看这三轮PCR是如何实现37重PCR的： 引物设计图 三轮PCR实现的过程。 （第一轮）：特异引物与靶序列退火延伸，几个循环就够了； 解释：低浓度引物，少量循环，使得引物间互不干扰； （第二轮）：第一轮的PCR产物取出，加入到新的PCR体系，但不加入新的引物，直至残存的引物消耗完毕； 解释：每一个特异引物消耗相等的量，使得每个PCR产物的量相等。为什么这么做呢，主要是为了测序的时候每个PCR产物能够被平均的覆盖到。 （第三轮）：对每一个特异产物加上样本编号，再加上测序引物。 解释：如果不加上样本编号序列，最后无法识别来源。 三轮PCR的优势：不同的PCR产物间量相等，最后测序时以较低的通量，可实现更多的样本与其不同产物能被测到。 如本文中，90%的PCR产物达到了15×以上，不同的产物之间reads比不超过50倍。的确不浪费测序通量。 作为科学家的您，如果也想来完成这个实验，您有两个选择： 【1】 您可以将整个过程委托我们来完成，最终您将收到样本的基因型信息； 【2】 您可以自己来完成，但引物合成、条件优化可委托我们来完成，最终您将收到优化的引物试剂、优化的反应条件；您只需完成PCR过程，并在自己的测序仪上完成测序；而成本不过每对引物250元（当前促销价）。 服务热线：021- 33559491 021- 33559492 |
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