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大家好，我就是SNP，集万千宠爱于一身的SNP，中文名字：单核苷酸多态性，厉害吧！ 为啥我能集万千宠爱于一身呢？花草离不开我、小动物离不开我、甚至人类都离不开我。人类有研究称，我引起的变异占人类基因组遗传多态性的90%以上，你说说，我随便的一个转换、颠换、插入、缺失都可能引起人类重大疾病的发生，就这魄力，能不得到重视吗？这不，人类已经专门为我定制了几套服务。下面，就由我来向大家介绍一下吧。 1 KASP™ 基因分型技术是一项独特的竞争性等位基因特异性PCR，可对各种基因组DNA样本，针对指定的SNP和InDel进行高精度双等位基因分型，非常适用于SNP位点数小于30的样本检测。 KASP技术通过设计两条等位基因特异性引物进行基因分型，共用反向引物来扩大靶区域，之后通过荧光信号的采集进行数据分析。 2 TaqMan探针法通过设计PCR引物和针对于位点的荧光探针实现对SNP的分型检测，适合少量SNP位点的分析。 其核心是利用Taq酶的3' -5' 外切核酸酶活性切断探针产生荧光信号。体系中包括一对PCR引物和一条探针，探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间，探针的5' 端标记有报告基因，3' 端标记有荧光淬灭基因，当探针完整的时候，报告基团所发射的荧光能量被淬灭基因吸收，仪器检测不到信号，但是基于独特的位点设计荧光探针，价格要比KASP需要的通用荧光探针高。 SNaPshot技术是一种基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，主要针对中等通量的SNP分型项目，通常用于10~30个SNP位点分析。 该技术使用引物扩增目标SNPs所在片段，使用测序酶、四种荧光标记ddNTP和 5' -端紧靠SNP位点的延伸引物进行PCR反应，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型，对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。 4 MassARRAY分子量阵列技术通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合，实现基因分型检测，该技术适合大样本、多位点SNP的基因分型检测。 质谱技术的主要特点是，先通过PCR扩增目标序列（可高达40重反应），然后加入SNP序列特异延伸引物，在SNP位点上，延伸1个碱基。激光照射使生物分子发生电离，离子在电场作用下飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，离子质量越小，就越快到达。 芯片检测是通过DNA芯片与待检测的序列进行杂交实现SNP分型，适合大样本、多位点SNP的检测。待测DNA经荧光染料标记后与已固定好的探针进行杂交，依据碱基互补配对，存在单个错配碱基的序列不能与探针杂交，通过杂交分子之间的洗脱差异性即荧光强弱来检测SNP位点。该技术的一个不足就是芯片定制的时间比较长且价格昂贵。 多重PCR_SNP基因分型检测是一种多重PCR和高通量测序相结合的高效SNP检测技术，可针对所有物种基因组DNA实现对大样本、多位点SNP的高效检测。 该技术针对待检SNP位点设计特异性引物，在单管内实现多重PCR的扩增。多重PCR的前两个阶段完成对目标区域的扩增富集，第三阶段时引物端会连接上测序接头和barcode，实现对不同样本的区分。文库构建好之后应用Illumina主流测序平台实现对扩增子的高通量测序，最后通过生物信息学分析SNP变异检测结果。 别看独自拥有这么多服务，本SNP可不是随便用的。根据这些技术的优缺点，我是物尽其用，当我位点数少的时候呢，选择KASP、TaqMan、SNaPshot为我服务，其中我最喜欢的还是KASP，效率高、周期短，名字也洋气啊；当位点数多的时候呢，质谱、芯片、多重PCR_SNP基因分型检测为我服务，其中我最喜欢多重PCR_SNP基因分型检测，周期短、成本低、效果好，名字这么长，一看就很踏实、稳重，妥妥的，没毛病！ 好嘞，炫耀完毕，不唠了，本SNP该去工作了，拜。。。 |
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