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1. RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。EP管及Tip头都要用0.1%处理(0.1% DEPC浸泡过夜后高压蒸气灭菌)。用于RNA实验的试剂须使用DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。最好在超净台内操作。 2、提取时操作带一次性手套、口罩等小心、细致、晃动及每次移液要轻在操作过程中避免讲话等。这样做的唯一目的就是两个：一是小心RNAse的污染降解RNA二是动作过度暴力破坏RNA的完整性。 3、电泳液需新鲜配制。电泳槽和模具需预先进行处理。 4. 一般RNA电泳应该是做甲醛变性电泳但是一般的琼脂糖电泳也可以需要上样量稍微大些并且跑电泳的时间越短越好(这样也是为了减少外界RNAse对RNA的降解)跑完电泳立刻观察。 5、需要用EB染色，Genefinder染色效果不好，其对双链DNA的效果好。 6、器材的处理尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。 （1）用0.1% DEPC焦碳酸二乙酯水溶液在37℃下处理12小时。 （2）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。 |
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