搜狐网 2018-06-29 11:52 这是个“谈癌色变”的年代。 在我们与癌细胞对抗战争的侦查阶段中,有“老侦查兵”和“新侦查兵”共同作战。 “老兵”即常规组织活检,Ta经验丰富,但不能区分肿瘤异质性,准确率低,患者需承担较大风险。 近几年,癌症检测“新侦察兵”—液体活检的表现更加突出。 作为体外诊断的一个分支,液体活检可以通过非侵入性取样降低检测危害,而且高效准确,性价比高。 图1 液体活检检测对象 目前,液体活检的检测对象有循环肿瘤细胞(CTCs),循环肿瘤DNA(ctDNA),循环RNA(circulating RNA)和外泌体。 其中,ctDNA因研究前景广阔,受到越来越多的关注。 ctDNA(circulating tumor DNA)是游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)中的一类,带有特征性标记,可通过高通量测序技术实现对它的定性、定量和追踪。 目前已发现的ctDNA特征性标记包括位点突变、核小体占有率及甲基化修饰差异,可根据这些指标的差异进行肿瘤的早期诊断、动态监测肿瘤的发生发展及疗效、耐药检测、复发风险评估和预后预测等。 下面,我们通过文献为大家介绍一下ctDNA的检测应用领域,揭开ctDNA在肿瘤研究中的神秘面纱: 1肿瘤早期诊断 01、检测对象 ctDNA位点突变,ctDNA甲基化 02、检测技术 目标序列捕获测序,数字PCR,全基因组甲基化测序,简化基因组甲基化测序 03、案例分析 1、通过检测ctDNA突变可检出NSCLC 对58名早期非小细胞肺癌患者的肿瘤组织DNA及相应ctDNA进行测序分析,检测到135个突变,其中ctDNA突变为76个。 对其中15个基因的tDNA和ctDNA突变情况进行比对,结果基本一致。 图2 ctDNA位点突变与肿瘤的关系 2、利用ctDNA甲基化簇鉴定癌症样本 对65例癌症患者及对照组ctDNA进行全基因组甲基化测序,比对后发现147888个甲基化簇(MHB)。 肺癌患者样本中,有明显的tissue-specific MHB信号,可以据此区分癌症及正常样本。 图3 ctDNA甲基化单倍型(MHB)可表征肿瘤 2肿瘤分型与组织来源鉴定 01、检测对象 核小体占位,ctDNA位点突变 02、检测技术 ChIP-seq,目标序列捕获测序 03、案例分析 1、ctDNA核小体包含率差异与组织起源 通过对cfDNA进行深度测序发现游离DNA核小体包含率与细胞中核体结构、基因结构与表达密切相关,可通过核小体包含率的差异揭示细胞类型的起源。 图4 cfDNA核小体分布与组织起源有关 2、ctDNA突变差异可用于肿瘤分型 对76名肿瘤活检分类为生殖B细胞样或非生殖B细胞样的患者,进行分子亚型分析,然后使用基于ctDNA突变的检测方法,进行同样的分型,结果的一致性为80%。 图5 ctDNA突变可用于肿瘤分型 3动态监测肿瘤发展与恶性程度 01、检测对象 ctDNA甲基化 02、检测技术 全基因组甲基化测序 03、案例分析 1、ctDNA甲基化水平判定肿瘤恶性程度 分析B细胞6个生长阶段及慢性淋巴细胞性白血病患者(CLL)血样的甲基化数据,根据ctDNA甲基化水平可将CLL的恶性程度进行区分(恶性程度LP>IP>HP),并且三种恶性程度的B细胞样本均可与结果不同生长阶段的正常B细胞甲基化水平对应。 图6 ctDNA甲基化水平与肿瘤恶性程度相关 4肿瘤预后评估 01、检测对象 ctDNA甲基化,ctDNA位点突变 02、检测技术 全基因组甲基化测序,简化基因组甲基化测序,目标序列捕获测序 03、案例分析 1、肝癌ctDNA样本中筛选出8个预后标志物 分析肝癌及对照组血液样本的DNA甲基化数据,对1933例样本进行靶向测序验证,筛选出8个预后相关标志物。 图7 筛选ctDNA甲基化差异位点作为预后预测靶位点 2、ctDNA的TP53、PIK3CA突变可表征患者预后效果 利用全基因组测序,对30例携带TP53、PIK3CA基因突变的患者治疗过程中的 ctDNA水平进行全程监控,发现ctDNA序列的动态变化与患者手术预后效果一致。 图8 ctDNA序列动态变化与患者预后 目前,液体活检这个新型“侦察兵”在肿瘤检测中的作用,正被越来越多的学者重视,关于ctDNA的临床应用与研究,在全球生命科学界如火如荼地进行。 而在国内,如华夏基因这样具备前瞻性的基因生物科技公司,在ctDNA的研究领域已领先一步,力求与国际尖端水平接轨。 |
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