做WB实验出现杂带怎么办?最全解决方案在这里

western blot 实验中，想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片，还是具有一定挑战性的。

看到这样的条带，小伙伴们的内心应该是崩溃的，

为什么师兄师姐做的条带很漂亮我的却这样?一起来看！

WB奇葩的条带问题大集合：

1. 出现黑点或黑斑

原因：试剂污染，抗体结合到封闭剂

解决方法：使用新鲜配置的试剂;过滤封闭液;选用其他类型封闭液

2. 条带中出现边缘规则的白圈

原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散

解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡;使用摇床孵育抗体

3. 条带拖尾

原因：样品有未溶颗粒;分离胶浓度偏大

解决方法：充分溶解，加样前离心;换小浓度分离胶

4. 条带扭曲，如微笑带

原因：胶未配好(凝胶未能完全聚合，胶中有颗粒或气泡，凝胶未冷却好，);电压过高;

解决方法：正确添加质量合格且未过期的 AP 及 TEMED;过滤配胶的试剂保证配胶过程中胶内无气泡;凝胶冷却好后再上样;降低电压

5. 出现非均一性背景

原因：膜可能曾经干过

解决方法：在实验过程中要保证膜一直处于湿润状

6. 条带中间出现白色(反白)

原因：中心部位高浓度 HRP 将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光

解决方法：降低蛋白量，降低一抗与二抗的浓度

7. 高背景

8. 非特异性条带(杂带)

另外，有些情况下的「杂带」带可能并不杂，例如

翻译后修饰对分子量的影响：