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01 实验动物 SD大鼠，体重200-250克，8周龄。 02 实验试剂 1）STZ(链脲佐菌素)无色固体2-8℃干燥避光保存，115℃可分解为气体水溶液不稳定，溶于双蒸水或盐溶液。但在低温下pH4-4.5是较为稳定。 2）柠檬酸钠，柠檬酸 用于调制缓冲溶液。 03 实验器材 1ml注射器，大鼠固定器。 04 试剂配制 1）柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5.0.1mol/L）配制0.1mol/L柠檬酸钠溶液，在用柠檬酸和氢氧化钠调节pH至4.5。 2）称量140mgSTZ溶解于10ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液，配制成14mg/mlSTZ溶液。 05 动物分组及造模 1）大鼠自由摄食，饮水，动物房保持室温20-25℃，并维持一定的光照。三天后，将大鼠随机分为实验组和对照组。 2）所有大鼠实验开始前12小时开始禁食但不禁水，禁食时间可根据情况顺延至18小时，但不要超过24小时。 3）将配置好的STZ溶液用锡箔纸包裹做避光处理并保存在冰水中，并在配制成功后30分钟内完整注射造模。 4）称量大鼠体重，采用腹腔注射给药进行造模，剂量为70mg/kg。对照组注射等量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。 06 模型指标检测 血糖测定：实验过程中腹腔注射STZ 48小时和72小时分段测定大鼠血糖并记录，采用剪尾采血法，使用血糖试纸进行检测。 ※两次检测血糖浓度均高于16.8mmol/ml，即可认为造模成功。 07 后期饲养 糖尿病大鼠会有很明显的“三多一少”症状，所以尽量分笼饲养，勤换垫料，并保证足够的饲料和饮水供给。 01 实验动物 SD糖尿病大鼠（八周以上大鼠，并糖尿病造模时间超过1周并少于2周）普通SD大鼠（八周以上，时间相近）。 02 实验试剂 1）水合氯醛（或戊巴比妥钠）用于麻醉实验大鼠。 2）医用酒精，表层消毒。 3）龙胆紫（或苦味酸，碘酊）创口标记染液。 4）试纸，标记创口，提前裁成直径为2cm的小圆片，并浸入标记染液中。 03 实验器械 手术剪，眼科镊，剪毛剪，（需提前高温灭菌）。 04 造模 1）麻醉： 将大鼠称重并按320mg/kg水合氯醛或40mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。 2）创面制作： 1. 将麻醉好的大鼠腹面朝下固定板上，固定四肢，在其背部侧面剪毛备皮，可以偏向背部，避免大鼠抓绕影响实验。 2. 常规消毒，用镊子夹取浸入龙胆紫溶液的直径2cm的滤纸贴于剪毛区，轻按纸片，使大鼠悲伤印上与纸片大小形状相同的标记区域。 3. 用剪刀沿标记边缘线剪去标志区表皮。 3）后期饲养观察：造模后的大鼠单独饲养，注意更换垫料保持环境干燥清洁。造模后，每隔两天，测量伤口直径，计算创面面积，并记录数据，绘制愈合速率曲线。 |
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