聊聊细胞分离和培养那些事儿

细胞培养是生命科学研究的重要方法之一。同时，在原代细胞培养的过程中，首要任务是从组织中分离细胞。但看似简单的细胞分离和培养技术，却不知难倒了多少英雄好汉。下面索莱宝和大家聊聊细胞分离与培养那些事儿。

如何分离细胞？

从原代组织中分离细胞，将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。然而，为了更好地测定细胞免疫功能，我们需要从动物外周血或组织中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等。分离这类免疫细胞的方法有：密度梯度离心法、黏附分离法、流式细胞仪分离法等其他分离法。目前最常用的是密度梯度离心法。索莱宝细胞分离液产品的研发原理就是基于不同细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布。

具体怎么实现呢？

以分离人外周血淋巴细胞为例：

1. 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。

3. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min。

4. 离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心地吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。

6. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

7. 重复步骤6。

8. 弃上清，细胞重悬备用。

精选索莱宝相关产品
货号	产品名称
P8610	人外周血淋巴细胞分离液
R1018	细胞洗涤液
31800	RPMI Medium 1640
R1017	全血及组织稀释液
YA0902	一次性巴氏德吸管-3ml
YA1332	真空采血管 肝素钠 PET材质（绿色）

细胞分离时别忘了做到这些！

1. 无菌操作：在样品收集和分离过程中，应注意无菌操作，避免微生物污染。

2. 保证新鲜：血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内），避免冷冻和冷藏，最优抗凝剂选择为EDTA、枸橼酸和肝素。

3. 分离液的保存：分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。

4. 细胞稀释及细胞洗涤液：稀释或洗涤细胞不可使用含、的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。

5. 注意添加顺序：样品在上，分离液在下，保持两液面界面清晰。

6. 离心管：选用玻璃材质离心管。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。

7. 离心：血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳的分离条件。

如何选择细胞分离液产品？

1.要有针对性地选择产品。不同细胞的密度与体积是不同的，不同种属动物细胞的密度也是不同的。索莱宝针对不同客户科研需求，研发了不同种细胞的分离液，如：淋巴细胞分离液、粒细胞分离液、白细胞分离液和单个核细胞分离液；针对不同种属动物，研发了不同动物的细胞分离液，如：人、小鼠、大鼠、鸡、兔、牛、狗等等。同时，索莱宝细胞分离液系列产品满足了外周血、组织脏器、骨髓等不同样品的分离。索莱宝丰富多样的产品满足了客户的多种科研需求。

2. 要选择分层效果明显的产品。索莱宝细胞分离液产品，性价比高，分层效果明显。以人外周血淋巴细胞分离液为例，索莱宝分离液产品分离的白膜层非常清晰，而且白膜层没有弥散，效果优于其他品牌同类产品。

分层图

3.要选择细胞沉淀纯度高的产品。使用索莱宝的细胞分离液产品得到的淋巴细胞较为纯净，红细胞污染极少，纯度大于90%。比其他品牌分离液分离的效果都好。

沉淀对比图

索莱宝相关产品
P8610	人外周血淋巴细胞分离液

千辛万苦得到的细胞

以为大功告成？

接下来是细胞培养

万里长征才刚刚开始

稍不注意

一下回到解放前！

细胞培养要注意哪些？

1. 无菌的环境与操作：在细胞培养的过程中，应保持无菌的实验环境并进行无菌操作。

2. 培养液的选择：每种细胞应该选择适合它的培养液。索莱宝的多种细胞培养液产品满足了不同细胞的需求。

3. 温度与pH值的监控：一般选择37℃和5% CO2培养体系。细胞培养液偏黄色的时候应及时更换培养液。

4. 预热培养液：为了使细胞更好地贴壁，应注意提前预热培养液。

5. 避免培养液暴露在荧光下：平时应注意将培养液储存在黑暗的环境中，荧光（紫外光）对于培养液（有细胞或无细胞）有不利影响。

6. 传代接种密度：在细胞传代的过程中要保证合适的接种密度。通过细胞计数来控制细胞传代的接种密度。同时，要注意观察细胞的状态和生长速度。

7. 避免细胞损伤：在细胞消化传代时，应注意胰蛋白酶的浓度以及消化的时间。轻柔地吹打细胞，避免机械损伤，选择适当的离心力。

8. 细胞冻存与复苏：冻存液中要加入保护剂：甘油或二甲基亚砜（DMSO）。冻存时要进行梯度降温。细胞复苏选择在37℃的水溶液中进行，解冻细胞速度要快。解冻后，细胞冻存管外壁要用纸擦干，避免污染。

精选索莱宝相关产品
货号	产品名称
11011-8611	优级胎牛血清 (无噬菌体低内毒素)
T1300	胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚红
P1400	青链霉素混合液(100×)细胞培养专用
31600	DMEM(低糖，含双抗)
11965	DMEM 高糖，含L-谷氨酰胺、酚红，不含丙酮酸钠、HEPES
D8371	二甲基亚砜 DMSO (细胞培养级)