10x Genomics单细胞转录组测序

▲其明10x单细胞测序平台的技术优势

10x Genomics

单细胞转录组测序

单细胞测序技术是以单个细胞为单位，通过全基因组或转录组扩增，进行高通量测序，获得相应数据并进行信息分析的技术。

通过信息发掘、研究可揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间的异质性，其在肿瘤、发育生物学、微生物学、神经科学等领域发挥重要作用。

与基因组不同的是，转录组的研究有着时间和空间上的限制，即同一细胞在不同的生长阶段和环境下，其基因的表达情况是有所差别的。

技术原理

1.  含有 Barcode  信息的 Gel beads 在微流体“双十字”交叉系统的第一个进样口与样品和酶的混合物混合；在微流体“双十字”交叉系统的第二个进样口与油表面活性剂结合形成GEMs；

2.  Gel beads 溶解释放 Barcode 序列，开始对细胞进行标记；

3. 以GEMs（含有Barcode的Gel beads和细胞、反应试剂的混合物）构建标准测序文库。

操作流程

测序策略

• 测序策略：Illumina HiSeq PE150

• 推荐数据量：50000 raw reads/cell

分析策略

技术对比

	单细胞测序	传统高通量测序
检测 对象	一个细胞群中的每一个细胞进行测序分析	一个细胞群体的所有细胞进行整体测序
检测 数据量	100-200G （包含1000-6000个不同细胞的基因表达）	6-15G （仅包含一个整体细胞群体的基因表达）
探索 能力	可发现每一个细胞的特性（除19000-23000个基因表达以外，还包含每个细胞1000-5000个基因表达）	19000-23000个基因表达
应用 领域	肿瘤、生殖、胚胎发育、神经生物学，疾病，免疫研究等	常规研究领域
优势	1、可有效解决细胞群体异质性问题 2、可对珍贵微量样本进行测序 3、准确分析每一个细胞的基因表达 4、能准确区分细胞群体，并进行细胞分类间比较 5、技术新颖，可探索性大	1、价格较低 2、技术成熟，周期短

其明的优势

适用样本类型

10x Genomics技术可测序的样品类型广泛，如：组织、细胞、细胞核、植物(需制备原生质体)等。

样本准备要求

• 样品总量：细胞悬浮液，一个样本细胞起始量约1X105个。

• 样品浓度：最低浓度不低于1X103cells/μL。

• 细胞活性：活细胞数在80%以上。

• 细胞大小：小于40μm。

• 细胞培养基及缓冲液不能含有Ca2+和Mg2+等影响酶活性的物质。

Tips：其明信息提供携带10x Genomics上门建库服务！

直击实验现场

测序服务流程

	1、实验设计 根据客户的实验/样本信息，提供可行的实验设计方案。
2、上门服务 携带细胞活性检测、10X Genomics等设备上门服务，保证样本获取后能够快速上机。

	3、制备单细胞悬液 提供单细胞悬液制作方面的技术指导，帮助客户完成从组织到高质量单细胞悬液的制备过程。
4、细胞质量检测 检测单细胞悬液中细胞的活性状态，并在10秒左右完成细胞计数，现场计算上样量。

	5、单细胞分离 使用10X Genomics制备油包水，将单细胞悬液中的细胞进行分离标记。
6、单细胞建库

	7、上机测序 使用HiSeq PE150测序平台对单细胞转录组文库进行高通量检测。
8、数据分析 其明信息团队有十四年生信分析经验，为单细胞测序开发了独特而稳定的分析策略进行数据挖掘。

9、售后报告讲解 有技术人员为客户讲解结果报告并处理其他技术咨询问题。