|
蛋白质中的一些基团能与某些试剂反应，生成有色物质，统称蛋白质的颜色反应。颜色反应可用于蛋白质的定性及定量检测。常用的反应如下： 蛋白质与CuSO4碱性溶液发生反应，生成紫红色或蓝紫色的复合物，称为双缩脲反应。双缩脲反应是检测肽键的，含有两个或两个以上肽键的化合物都能发生。这个反应可用于定性鉴定，也可在540nm比色，定量测定蛋白含量。  双缩脲反应生成紫色复合物 其实这个反应并不需要双缩脲参与，只是双缩脲也能发生类似反应而已。双缩脲是由两分子尿素缩合而成的，结构与肽键类似。最初这个反应就是用来检测双缩脲的，所以称为双缩脲反应。  双缩脲 Folin-酚反应也称为费林反应，但不要与检测还原糖的Fehling反应混淆。Folin-酚反应是双缩脲反应的发展，蛋白质与铜离子生成复合物后，其分子中的酪氨酸和色氨酸还原Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸，生成蓝色化合物（钨蓝和钼蓝的混合物）。 此反应灵敏度很高，常用来测定蛋白含量。这个方法最初由Folin建立，后来经Lowry改进，所以也称为Lowry法。根据汤森路透公司的统计，Oliver Lowry那篇论文的引用次数已超过30万次，高居引用榜之首。  Lowry法原始论文的引用次数已超过30万 蛋白质的黄色反应是指含有芳香族氨基酸特别是酪氨酸和色氨酸的蛋白质在溶液中遇到硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色还会加深，变为橙黄色。这是因为苯环被硝化，产生了硝基苯衍生物。这个反应很灵敏，皮肤、毛发、指甲中的角蛋白遇浓硝酸都会发生反应。  蛋白质的黄色反应 米伦试剂是硝酸汞、亚硝酸汞硝酸和亚硝酸的混合物，蛋白质加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后变成红色。酚类化合物有此反应，酪氨酸及含酪氨酸的化合物都有此反应。 坂口反应是指精氨酸的胍基与次氯酸钠（或次溴酸钠）及α萘酚在氢氧化钠溶液中产生红色物质。此反应可用来鉴定含精氨酸的蛋白质，也可用于定量测定精氨酸含量。 在蛋白溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，称为紫环反应或乙醛酸反应。凡含有吲哚基的化合物都有此反应。不含色氨酸的白明胶就无此反应。前面有些反应也是依赖于特定的氨基酸，如果这种氨基酸含量很低，或位于蛋白质内部，就可能不发生反应。 蛋白质也可以发生茚三酮反应。但是这个反应需要游离的α-氨基和α-羧基，所以肽链越长，灵敏度就越差，不能用于定量。 |
|
|
