了解这些，轻松分析造血干/祖细胞的表型！

选择正确的细胞是所有细胞实验项目开始的第一步。无柱的免疫磁珠细胞分选可以快速、简便地分离特定的细胞种类，但在有的实验中还需要进行更加精确的分选。作为一种革命性的实验工具，流式细胞术（Flow Cytometry）彻底改变了我们分选高特异性细胞群的能力。

一般来说，鉴定造血干细胞（HSC）只能通过体内实验检测HSCs在移植后重建造血系统的能力。鉴定造血祖细胞（HPC）的方法除了体内移植，还可以在体外检测其增殖和分化能力。多参数流式细胞术是一种非常重要的工具，它可以基于细胞表面标志物对这些造血干细胞和祖细胞（HSPC）群体进行表型细分，并了解这种异质细胞群中不同亚群的多种功能。此外，它也可以基于检测胞内的ALDH来对造血干细胞和祖细胞进行分析，具体的原理和步骤请戳这里。

人HSPCs中最被熟知的标志物是细胞表面糖蛋白CD34。该标志物可用于从骨髓和血液中鉴定和分离HSPCs，因为它在大多数（非全部）人HSPCs上高表达，但不表达于成熟血细胞。CD34+细胞不表达成熟血细胞具有的所谓谱系（Lin）标志物，例如CD2、CD3、CD11b、CD11c、CD14、CD16、CD19、CD24、CD56、CD66b和CD235。CD34+细胞群在其它标志物的表达方面具有异质性，例如CD38、CD45RA、CD90和CD49f。如表1所示，可以通过这些标志物的不同组合来区分各HSPC亚群不同的造血重建潜力。

表1. 造血干细胞和祖细胞亚群及标志物

当研究罕见的干/祖细胞群时，对免疫表型分型数据的精准度要求非常高。然而在骨髓和血液中HSPC的比例非常低。因此，为了节省时间和试剂，并提高分析的准确性，最好对已纯化的CD34+或谱系去除的细胞进行免疫表型分型。实验的设计和荧光抗体的选择很大程度上取决于实验目的和可用的流式细胞仪的配置。我们对经典论文和最新的文献进行数据汇编整理，以构建优化用于这些细胞鉴定的HSPC表型鉴定表。

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鉴定表设计

表2展示了用于HSPC亚群分析时推荐的荧光标记抗体。该表在设计时选择用最亮的荧光染料PE检测表达量最低的细胞表面标记物CD90。PE适用于配有488nm蓝色激光和640nm红色激光以及四个或更多荧光通道的流式细胞仪，大多数实验室或流式平台皆配备有满足该要求的流式细胞仪。数据采集、门控和亚群识别的优化设置取决于仪器，需要根据实验者自身经验进行调整。下面是HSPC免疫表型分析的推荐染色抗体，其中抗体已经过内部测试，以在常用流式细胞仪分析时提供最佳分辨率和灵活性。

表2. 用于HSPC表型分析的推荐染料及抗体

图1. CD34+CD38-CD45RA-CD90+ HSC亚群的设门策略