抗体库有哪些？

目前用噬菌体抗体库技术，能够展示多种形式的抗体，除了常见的ScFv和Fab，也可以用来获得Diabody、DsFv和minibody等其他形式的抗体。因为这些新型的抗体都有一些特别的性质，使他们更适合于做临床诊断及治疗用制剂。在一定程度上代表了抗体的研究方向。

（一）DsFv抗体库

DsFv称为二硫键稳定性抗体（disulfide-stabilized Fv fragment，DsFv），是在ScFv的基础上发展起来的一类机具应用潜力的新型小分子抗体，能增强小分子Fv抗体的稳定性。

很多情况下，ScFv在37℃很不稳定，容易聚集成多聚物，这是由于ScFv的非共价作用不能保持他们的稳定而导ScFv可变区单体的互相解离，一旦解离，一个ScFv的VH和VL就会和另一个ScFv的VH和VL结合形成二聚体，进而形成多聚物发生沉淀。实验证明，ScFv免疫毒素在人血清和不同缓冲液中37℃温育2~8h经常出现凝集或失去大部分甚至全部细胞毒活性。

DsFv是通过在VH和VL间形成二硫键而实现结构稳定的。用基因工程制备dsFv的方法，一般是在已知ScFv序列的基础上，分别在VH和VL之间形成稳定的二硫键。

Brinkmann等将抗IL-2受体p55亚单位的抗体V基因进行了定点突变，分别在VH₄₄（FR₂）和VL₁₀₀（3'端）处引入一个半胱氨酸突变，用噬菌体技术成功的进行了功能性展示。

后又用相似的思路，从未经免疫的小鼠脾细胞中构建的dsFv天然抗体库，并用活的白血病细胞筛选出特异性抗Tac的dsFv抗体。因为VL₁₀₀处于VL的3’端，所以在3'端引物中的相应位置设计引入一个半胱氨酸就可以。而VH₄₄处于FR₂区，相当于基因的中间位置，不能从末端设计引物引入半胱氨酸，所以他们将VH分成两段，在中间设计含半胱氨酸的引物，将两段基因分别扩增，然后拼接成完整的VH基因。最后将VH和VL组装到噬菌体载体pCANTAB5中，两个基因各自表达，其中VL于GIIIp融合，在前导肽序列引导下进入细菌周质腔，自动组装成dsFv展示于噬菌体表面。由于在构建合成抗体库及次级抗体库时，所利用的基本骨架序列是已知的，更容易在随机化某些序列时同时将半胱氨酸引入相应的位点，构建成DsFv形式的合成抗体库或次级抗体库。

（二）Diabody库

Diabody可译成“双链抗体”或“小抗体”，是由两个ScFv通过非共价结合而形成的二聚体。可以直接筛选双特异性Diabody。将ScFv改造成Disbody，在基因操作上主要是将VH 和VL之间的Linker缩短。在Diabody中，每一条链都有通过短链链接的VH和VL，避免形成链内互补。而互补只能发生在两条不同的肽链之间，故可形成刚性、稳定、非共价结合的二聚体，并具有两个结合位点。Diabody也可以是双特异性的，通过一个足够短的Linker将同一抗体的重链和另一抗体的轻链链接起来构建成杂合ScFv，同理再以VLα于VHβ构建另一杂合ScFv，当两者同时表达时，由于短的Linker的限制，位于同一ScFv链的VH和VL难以匹配，被迫于另一ScFv的、但实际却来源相同的V区进行交叉匹配，巧妙的形成有两个抗原结合位点的二聚体，成为双功能抗体的缩微形式。这样Diabody就集中了双功能抗体和单链抗体的双重优势，因此无论是作为药物导向载体还是用于免疫显像诊断，都有很大的潜力。

（三）Minibody

在天然Ig分子中，两个重链的CH₃区有密切的相互作用，形成紧密的球状结构，其亲和力达到10^-10~10^-12mol/l，是重链形成二聚体的关键部位，将单抗ScFv C端与人IgG的CH₃ 融合，表达的融合蛋白可以在细胞内自动形成共价键结合的双价抗体，称为minibody。Minibody稳定性和肿瘤摄取都进一步提高，Dimasi等于1997年首次构建了噬菌体minibody库，使大规模筛选minibody称为可能。