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外泌体是一种由活细胞分泌，直径在40-150nm，具有双层脂质膜结构的小囊泡，它在机体内广泛存在，如外周血、腹水、尿液、唾液、脑脊液等各种体液中。外泌体能递送有功能的分子，包括蛋白质、脂质和核酸给受体细胞，参与细胞间通讯，影响细胞的各种生理与病理功能，所以吸引了很多科研人员的关注，再深入研究外泌体前，能够得到高纯度的外泌体至关重要，下面为大家介绍一下实验室常用的外泌体提取方法。 目前，实验室常用的分离外泌体的方法：超速离心法，聚合物沉淀法，分子排阻法，超滤法，磁珠特异性捕获法等，下面来为大家依次介绍一下。 超速离心法：  超速离心法分离外泌体是目前最普遍的一种方法，该方法被广泛应用于各类生物样品，如血清、血浆、细胞培养液、尿液、唾液和脑脊液等的分析，也是目前分离方法中的“金标准”，据估计，采用超速离心法的研究者占所有外泌体分离方法的 56%。 优点： 该法不需要对外泌体进行标记或者使用其他分离试剂，不易被污染，适用于大剂量样品分离，外泌体纯度高。 缺点： 费时费力、高度依赖人工，回收率低，由于超高速离心，外泌体的结构、功能很容易遭到破坏，并且易聚集成块，下游分析不利。（虽是金标准，缺点还不少呢） 聚合物沉淀法：  聚合物沉淀法的原理是聚合物通过“劫持”水分子，从而造成外泌体溶解度的降低，进而在低速离心条件下发生沉降，这个图画的很清楚，不仅仅外泌体表面有水分子，一些杂蛋白的表面也有水分子，所以加入聚合物之后，外泌体和杂蛋白会聚集在一起并离心沉淀下来，所以说，沉淀法得到的外泌体纯度方面是个硬伤。许多公司开发了一系列针对不同样品来源 ( 血清、血浆、细胞培养液、尿样等 ) 的外泌体提取试剂盒，如果用它们提取外泌体核酸还是可以的，但是要是做外泌体蛋白质质谱，还是算了吧。 优点： 具有不需要大型昂贵仪器设备，可大剂量样品处理，使用方便、操作简单，成本低。 缺点： 纯度和回收率低、杂蛋白较多、颗粒大小不均一、产生难以去除的聚合物，影响下游分析。 分子排阻法：  分子排阻法，大分子物质不能进入凝胶孔，很快沿多孔凝胶间的缝隙被流动相洗脱出来，而小分子物质能进入凝胶孔，被滞留，更慢地被洗脱出来。通过外泌体和其他蛋白质等颗粒大小的不同来分离的，也就是说外泌体粒径大，它会先被洗脱下来，蛋白质的粒径小，它后洗脱下来，通过外泌体与蛋白质粒径的不同，分离出高纯度的外泌体。实验室的朋友可以选择填料，自己装柱，如果嫌费事儿的话，此方法的外泌体分离试剂盒也是可以买到的。 优点： 外泌体纯度较高，且外泌体结构不受破坏。 缺点： 可能混有尺寸相近其他颗粒，比如乳糜微粒、低密度脂蛋白等。 超滤法：  超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧，而将相对大分子物质截留在超滤膜上，以达到分离的目的。外泌体直径范围40～150nm，大于一般蛋白质，我们用孔径小于150nm 的超滤膜低速长时间离心就可以分离样本中的外泌体。 优点： 该技术操作简单、快速，成本低，使用方便、富集效率高。 缺点： 过膜易损耗变形，堵塞的可能性大，大颗粒蛋白污染严重，易附着膜而损失。 磁珠特异性捕获法：  外泌体表面带有许多特殊的膜蛋白质，如CD9、CD63、CD81、ANNEXIN和EpCAM等，可以用作分离外泌体的特异性标记。利用相应抗体与这些蛋白质间的特异性相互作用，将抗体固定于磁珠等基质上，以实现对外泌体的特异性富集。抗体包被的磁性小珠有效地用于从抗原呈递细胞分离外泌体。 优点： 免疫磁珠法分选具有特异性强、纯度较高、不影响外泌体结构形态的特点。 缺点： 此方法不适合从大量样本获得外泌体，基质的非特异性吸附会导致获得的外泌体中存在干扰蛋白质，且磁珠、抗体较为昂贵，保存条件苛刻，难以普及。 这些方法都可以对外泌体进行富集和纯化，朋友们可以根据自己实验的需求和实验室的条件，来合理选择外泌体的提取方法，相信总有一款适合你。下面我想为大家介绍一个很有潜力的外泌体提取方向法——亲和色谱法 |
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