1、技术原理:
基因敲入(gene knock-in)是通过同源重组用一种基因替换另一种基因,以便在体内测定它们是否具有相同的功能,或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。通过基因断裂诱导的同源重组在安全位点(如Rosa26)插入外源表达框或在其他内源基因。比如插入需要表达的功能性CDNA(如Cre, Dre等)或报告基因(如EGFP、mCherry、RFP、YFP、LacZ、Luciferase等)、标签等。
基因敲入:
2、技术优势:
① 选择靶位点并设计sgRNA,设计同源重组载体(可选);
② 独特的编辑技术:经过特殊优化的CRISPR/Cas9技术,可使外源基因在细胞中稳定精准表达,可用来高效构建敲入细胞株;
③ 一流的专家技术团队:由国内知名基因编辑专家领衔,团队技术专业,经验丰富。
3、质量控制:
① gRNA序列测序
② 引入基因序列测序
③ 载体酶切鉴定
④ 载体实验报告
4、应用:
摸拟人类遗传机制,探索致病机制;定点过表达,基因示踪;进行谱系示踪,追溯细胞起源。