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单端测序(Single

 张家逍遥阁 2019-11-08

单端测序(Single-read)

一.流程
(1)将DNA样品片段化处理形成200-500bp片段
(2)引物序列连接到DNA片段一端,然后末端加上接头。
(3)将片段固定在flowcell上生成DNA蔟,上机测序单端读取序列。
在这里插入图片描述

双端测序(Paired-end和Mate-pair)

二.与Paired-end的区别
Paired-end方法是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点,在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链,用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮测序所用的模板量,进行第二轮互补链的合成测序(图2)。
在这里插入图片描述
三.Mate-pair文库构建方法
(1)将基因组DNA随机打断到特定大小(2-10kb)
在这里插入图片描述
(2)末端修复、生物素标记、环化
(3)将环化后的DNA分子打断成400-600bp的片段
(4)通过带有链亲和霉素的磁珠把带有生物素标记的片段捕获
(5)捕获片段经过末端修饰和加上特定接头后建成mate-pair文库,然后在上机测序。
在这里插入图片描述
Mate-pair文库制备旨在生成一些短的DNA片段,这些片段包含基因组中较大跨度(2-10 kb)
片段两端的序列。

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