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槲皮素（Quercetin）又称栎精，是植物中最常见的黄酮类物质。从大多数蔬菜、水果以及中草药中都能提取分离槲皮素[1]，特别在洋葱和沙棘中槲皮素含量较高。研究表明槲皮素具有多种药理作用，包括抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗血栓以及止咳平喘等[2-4]。在临床研究方面，槲皮素主要用于治疗糖尿病和过敏性疾病，以及预防肿瘤、降血压和保护心血管等。槲皮素作为一种天然的抗氧化剂，具有广阔的应用前景。本文在体外条件下对其抗氧化活性进行检测和评价，对槲皮素的工业应用和临床使用具有指导意义。 再次，网络传播中的自由性、开放性与狂欢要求的客观环境相吻合。狂欢生活是在“广场”上进行的。“广场”不仅是一个具体的场所，而且是大众性、民间性舞台的隐喻。网络传播的自由与开放的属性体现在每个网民自由地进行信息选择与交流，这使得网络传播与以往的传统媒体不同，具有强烈的民间色彩。这种民间色彩满足了狂欢的大众性和民间化特征。 1 实验方法1.1 DPPH 法化学名1，1- 二苯基-2- 三硝基苯肼，其溶液在517 nm 处有最大吸收值，且与浓度呈线性关系。抗氧化剂能够结合或替代DPPH，使溶液吸光度变小，通过检测517 nm 的吸光度值计算物质的抗氧化能力。取试管编号为0 至6，将0 号试管作为空白对照，其余试管依次加入5 mM、2.5 mM、1.25 mM、0.62 mM、0.31 mM和0.15 mM的槲皮素溶液50 μl。每只试管按表1 加入各组分，混匀后静置30 min。95%乙醇调零，测定各管517 nm的吸光度值。计算自由基清除率：  （A 为各组吸光度值，A0 为对照组吸光度值） 表1 试剂添加量  槲皮素 DPPH（40 �g/ml） 95%乙醇 对照组 0 µl 2 ml 1 ml 实验组 50 µl 2 ml 950 µl 1.2 CUPRAC 法抗氧化物能将反应体系中的二价铜离子（Cu2+）还原为亚铜离子（Cu+）。亚铜离子与新亚铜试剂结合形成一种络合物，在450 nm 处有最大吸收峰。通过测定样品450 nm 的吸光度值，来评价其还原铜离子的能力。取试管编号为0 至6。将0 号试管作为调零组加入100 μl 95%乙醇，1-6 号试管分别加入不同浓度槲皮素溶液100 μl，每管分别加入1 ml 5 mM CuSO4 溶液、1 ml 3.75 mM 新亚铜试剂、1 ml 乙酸铵溶液和1 ml 纯水。混匀后放置30 min 使试剂充分反应，测定各管在450 nm 的吸光度值。 1.3 β- 胡萝卜素/亚油酸体系法乳化的亚油酸能够自我氧化产生大量自由基，使β- 胡萝卜素褪色。抗氧化剂则能延缓褪色过程。向反应体系中加入样品，记录不同时间下反应体系470 nm 的吸光度值，可计算样品对脂质氧化的抑制率。取1.21 mg/ml 的β- 胡萝卜素- 氯仿溶液0.5 ml、0.5 g/ml 的亚油酸- 氯仿溶液0.2 ml 和0.5 g/ml 吐温40- 氯仿溶液1 ml 加入250 ml 圆底烧瓶，40℃旋转蒸发2 min 除去氯仿，加入100 ml 蒸馏水混匀得到β- 胡萝卜素- 亚油酸溶液。取0.5 g/ml 的亚油酸- 氯仿溶液0.2 ml 和0.5 g/ml吐温40- 氯仿溶液1 ml 加入250 ml 圆底烧瓶，40℃旋转蒸发2 min 除去氯仿，加入100 ml 蒸馏水混匀得到亚油酸溶液。取45 ml β- 胡萝卜素- 亚油酸溶液和4 ml pH 7.0 磷酸盐缓冲液混匀得到反应介质溶液。 人工智能的技术革命，带动的是劳动法的革命，影响是巨大而深远的。一种观点认为，人工智能的兴盛带来的却是劳动法的衰落，一个直接原因是劳动法旨在保护的劳动者数量减少。当然这仅是表达了对未来的忧虑，现实未必那么糟糕。然而无论如何，面对人工智能带来的冲击波，劳动法不能原地踏步，而应做出有效的回应。 取六只试管分两组，分别编号为0、1、2。将0 号试管作为调零组加入亚油酸溶液。1 号试管为对照组加入0.1 ml 的乙醇溶液，2 号试管为实验组加入0.1 ml 的5 mM槲皮素溶液，每管分别加入4ml 的反应介质溶液。第一组试管加样完毕后混匀，测定溶液470 nm 的吸光度值。第二组试管加样完毕后混匀，50℃水浴中孵育180 min，测定其470 nm 的吸光度值。计算槲皮素对脂质过氧化的抑制率：  （A0 和A00 分别表示在t=0 时刻样品和对照组的吸光度） 1.4 抗氧化活性影响因素将槲皮素溶液分别放置不同时间、温度、pH 和紫外照射条件下，用DPPH 法测定各因素对槲皮素清除自由基能力的影响。 2 实验结果2.1 清除自由基能力槲皮素具有良好的清除DPPH 自由基的能力。随着槲皮素浓度增加其清除自由基能力显著增加，在浓度高于1.25 mM后，清除能力增加减缓。在2.5 mM至0.15625 mM浓度范围内其自由基清除能力与抗坏血酸相似，但在高于5 mM浓度时，其清除自由基能力弱于抗坏血酸。 2.2 还原金属铜离子能力槲皮素具有较好的还原金属铜离子的能力。随着槲皮素浓度增加其还原铜离子能力逐渐增加。在0.15 mM至2.5 mM浓度范围内槲皮素还原能力与没食子酸相同，但在高于5 mM浓度时，其清除能力显著低于没食子酸。 2.3 抑制脂质过氧化能力在470 nm 处分别测得各管0 min 和180 min 的吸光度值，结果见表2。根据抑制率公式计算得出5 mM的槲皮素对脂质过氧化的抑制率达到85.7%。表明槲皮素具有良好的抑制脂质过氧化能力。 2.2.1 建成区扩展数量和强度 德州市主要建成区从1997年的85.39 km2增加到2017年的151.56 km2，净增长面积达66.17 km2，增加了1.77倍，平均年增长3.30 km2（见表2）． 表2 吸光度值  对照组 实验组 0 min 0.078 0.075 150 min 0.071 0.074 2.4 抗氧化活性影响因素将槲皮素稀释至浓度为1.25 mM，4℃避光保存。随着保存时间的增加，槲皮素清除自由基能力逐渐下降，存放30 d 后，其清除能力下降约17%；将1.25 mM的槲皮素溶液置于不同温度下孵育24 h，结果显示在低于20℃条件下，其清除能力并无明显变化，随着温度逐渐增加，其清除能力显著降低，75℃条件下清除能力降低约10%；紫外照射24 h 对槲皮素自由基清除能力无影响；pH 对槲皮素自由基清除能力影响较大，在pH 2.0 时清除率约为30%，随着pH 增加其清除能力逐渐增加，在pH 为5-6 时达到最大清除能力，约为60%，随着pH 继续增加其清除能力急剧降低，在pH 9.0 时，清除率仅为10%。 3 结论通过DPPH 自由基清除实验、铜离子还原能力测定以及抑制脂质过氧化实验，证明槲皮素在体外条件下具有良好的抗氧化活性，可作为有效的抗氧化剂使用；时间和温度是影响槲皮素抗氧化活性的重要因素，提示我们在应用中一方面要现用现配，另一方面对配制好的槲皮素溶液要低温保存，来避免其抗氧化活性的丧失；为了充分发挥槲皮素的抗氧化作用，应将其pH 维持在5.0 至6.0 之间。 式中：E为容积功率耗散，W/m3；ρ为水的密度，取1000 kg/m3；B为过鱼池宽度，取3 m；h为水池中的平均水深，取1 m；L为过鱼池长度，取4 m；d为隔板厚度，取0.3 m；Δ h为隔板水位差，取0.051 m。 参考文献 [1]康淑荷.中国天然植物中槲皮素提取工艺综述[J].化学世界，2017，58(10)：624-630 [2]Hirpara K V， Aggarwal P， Mukherjee A J， et al. Quercetin and its derivatives： synthesis， pharmacological uses with special emphasis on anti-tumor properties and prodrug with enhanced bio-availability [J].Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry，2009，9(2)：138-61. [3]Liao Y R， Lin J Y. Quercetin， but not its metabolite quercetin-3-glucuronide， exerts prophylactic immunostimulatory activity and therapeutic antiinflammatory effects on lipopolysaccharide-treated mouse peritoneal macrophages ex vivo[J].J Agric Food Chem， 2014， 62(13)：2872-2880. [4]李聪，胡强，张燕翔，王超.槲皮素的药理学活性研究进展[J].湖北中医杂志，2018(6)：63-66. |
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