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解开分泌型荧光素酶的神秘面纱

 艾美捷科技 2019-12-17

作为报告基因,荧光蛋白(如绿色荧光蛋白(GFP)及其变体红色荧光蛋白(RFP)和黄色荧光蛋白(YFP)或者生物荧光素酶(如萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)海参荧光素酶(Renilla luciferase,Rluc))已成为研究基因调控、抗*药*活性考察、基因突变分析、生物成像、DNA杂交分析及实时监测肿瘤发生*展情况等生物过程的潜在有效分析工具。


但GFP等荧光蛋白的灵敏性相比于荧光素酶要低很多,而且GFP在细胞内容易累积,使其不适合实时监测。现有的生物荧光素酶中,Fluc发光时需要辅助因子ATP和Mg2+,Rluc虽然不依赖于ATP和Mg2+等辅助因子,但光子产量较低,另外Fluc和Rluc均不能分泌表达,监测酶活性时需要裂解细胞,操作繁琐且不能实现对实验现象的连续观察。
近年,发现的一种来源于海洋桡脚类动物Gaussia princeps的Gaussia 分泌型荧光素酶是体内已知*小的可自然分泌的荧光素酶。因其可分泌、易于监测、灵敏度过、半衰期短、可进行活细胞或生物体实时监测等特性,在研究蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白定位、小干扰RNA(siRNA)沉默技术、肿瘤模型药*治*评价、监测启动子活性、实时监测肿瘤发生*展情况和高通量药*筛选等中得到广泛应用。通过报告基因载体,Gaussia可用于哺乳动物细胞表达。表达后的Gaussia为单条肽链的单体酶,其分子较小(185aa),且具有分泌性信号肽,因此可通过内质网分泌到细胞外。该荧光素梅催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm),该反应无需ATP参与。

分泌型双荧光素酶检测试剂盒,货号:LF031
Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit用于检测双报告系统中Gaussia Luciferase (GLuc)和Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP)的活性。GLuc和SEAP都是分泌型蛋白,无需裂解细胞就能从培养基中获得实验样本。
分泌型单荧光素酶检测试剂盒,货号:LF061
试剂盒提供两种用于Gluc分析的缓冲液。Buffer GL-S含有稳定剂,弥补了Gluc信号快速衰退的缺点,可用于稳定活性分析。Buffer GL-H适用于检测低表达量的Gluc活性,可以提供更高的灵敏度。
荧光素酶报告基因载体,货号:ZX101

与其他荧光素酶相比,使用Gaussia 作为报告基因有更多的优势:
1. 分泌型荧光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;
2. 发光强度高,是其它荧光素酶的1千倍;
3. 反应无须ATP,不受ATP影响;
4. 稳定性高,对温度、PH值等耐受性强。


分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)是人胎盘碱性磷酸酶的突变体,*大特点是能由表达细胞分泌到细胞外,检测时可在不破坏细胞的情况下,任意时间点取细胞培养上清液进行重复、动态的检测,常作为荧光素酶检测过程中信号标准化的内参。
GeneCopoeia 提供预制和定制的 GLuc-ON™ 启动子克隆,包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以 Gluc 作为启动子的报告基因;双报告基因载体系统以 Gluc 作为启动子报告基因,以SEAP作为信号标准化的内参,可在活细胞中对超过 20,000 种人和 18,000 种小鼠启动子进行实时活性分析。

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