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免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与ProteinA/G偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。
在免疫沉淀实验后的WB验证环节中，当使用常规的 Anti-IgG (H+L) 酶标二抗时，通常会出现对应免疫沉淀一抗变性后产生的重链（50kDa）和轻链（25kDa）两条带。如果检测的目的蛋白分子量在此附近时，就会受到这两条带的干扰。
如何避免IP检测过程中的重、轻链干扰，两种方案可供参考：
方案一：选择WB一抗时，选择和IP用一抗不同的种属，避免IP一抗的干扰
山羊抗兔IgG二抗，HRP标记，AMJ-AB2003
方案二：选择只和重链或轻链反应的二抗
IP™ 山羊抗小鼠IgG轻链二抗，HRP标记，AMJ-AB2016
IP™ 山羊抗兔IgG重链二抗，HRP标记，AMJ-AB2019
如果目标蛋白分子量小于30KD，为了避免抗体轻链的干扰，选择重链特异性二抗；如果目标蛋白分子量大于30KD，为了避免抗体重链的干扰，选择轻链特异性二抗。
IP实验常见问题汇总：
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