一种中药药物原料（银杏内酯A）的制作方法（专利）

一种中药药物原料的制作方法 【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，本发明公开了一种中药药物原料，其特征在于中药药物原料中银杏内酯B含量大于等于97.0％小于100％，银杏内酯A含量大于等于0.5％小于3％。本发明中药药物原料通过稳定性试验和急性毒性试验筛选获得；研究表明，该中药原料具有稳定性高、毒性低的优点。 【专利说明】一种中药药物原料 【技术领域】 [0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种含有银杏内酯B的药物原料及其制备方法和制剂。 【背景技术】 [0002]银杏(Ginkgo bilobal)系银杏科植物，主产地为中国江苏邳州、山东郯城、广西桂林等，是中国特有的世界最 古老的起源久远的珍稀树种之一，是在地质时代曾占广大面积的植物种族，1.5亿年前第三纪有化石发现，300万年前第四纪冰川期大部分灭绝后残留下来至今的植物，属国家一级保护植物。银杏药用价值主要在叶和果实，银杏现代开发仍集中在银杏叶上，银杏叶性平，味甘、苦、潘，归心、肺经，能敛肺、平喘、活血化淤、止痛，传统中医主要治疗肺虚咳喘、冠心病、心绞痛等。随银杏叶现代药理作用深入研究，临床不仅用于治疗心血管、呼吸、神经系统疾病，还发展治疗视网膜疾病、肾病、糖尿病引起的器管组织病变、肿瘤及妇产科和口腔医学等领域。 [0003]现代药理学研究表明，银杏具有清除自由基、抗脂质过氧化作用、改善脑缺血和中枢神经系统作用、显著降低血清胆固醇和三酰甘油水平、拮抗血小板活化因子(PAF)作用、对心血管系统的作用、抗血栓与抗凝作用、对心脏作用、抗肿瘤等等，银杏叶药用价值突出。自上世纪60年代，心血管疾病发病率较高的美国、欧洲国家率先从中国古老树种银杏叶里提取银杏黄酮与银杏内酯，目前至少130多个国家销售银杏叶制剂。近5年来国内银杏叶研究颇多，我国银杏树占全世界总量的70%以上，国外90%银杏叶药用货来源我国，在崇尚自然、生命质量的21世纪，充分保护和利用这珍贵资源，采用现代高科技，系统研究开发应用银杏叶制剂，防治疾病，前景积极可观。 [0004]银杏叶有广泛生物活性，化学成分种类较多，为黄酮类、萜类、有机酸、生物碱、多糖类、酚类、氨基酸、留体化合物、微量元素等，但最主要是药用价值成分萜类内酯和银杏黄酮类。银杏叶萜内酯类成分，分离得5个萜内酯类成分，分别为倍半萜类白果内酯(I)、二萜类银杏内酯A(II)、银杏内酯B(III)、银杏内酯C(IV)、银杏内酯J(V)。银杏内酯分子为独特十二碳骨架结构，有I个叔丁基和6个5元环。银杏叶含近38种黄酮类化合物，银杏黄酮类均衍生于母体化合物黄酮，以糖苷和甲基化形式存在。其中双黄酮6种，黄酮苷元7种，黄酮苷17种，黄酮苷主要是槲皮素、山萘素、异鼠李素糖苷及儿茶素类。另有抗肿瘤成分聚戊烯醇。其中银杏内酯B是一种活性强的血小板活化因子(PAF)拮抗剂，能竞争性地与PAF受体结合，抑制PAF的作用；因此，凡涉及与PAF相关的病症，如:血栓形成、脑组织损伤、器官移植排斥、急性炎症、心脏过敏、细胞内毒素及IgG导致的休克等，银杏内酯B均有一定疗效。 [0005]研究开发以银杏内酯B为原料的中药新药，是医药科研工作者的重要工作。  【发明内容】  [0006]基于上述原因， 申请人:对于含有银杏内酯B的中药原料进行研究，研究结果表明，银杏内酯B原料中银杏内酯B含量大于等于97.0%小于100%，银杏内酯A含量大于等于 0.5%小于3% ;该中药原料具有稳定性高、毒性低的优点。 [0007]本发明通过下述技术方案实现的。 [0008]一种中药药物原料，中药药物原料中银杏内酯B含量大于等于97.0%小于100%，银杏内酯A含量大于等于0.5%小于3%。 [0009]其中中药药物原料中银杏内酯B含量大于等于97.0 %小于100 %，银杏内酯A含量大于等于2.0%小于3%。 [0010]上述所述的中药药 物原料制备成药物制剂。 [0011]上述所述的中药药物原料的制备方法为: [0012]取银杏叶提取物，加入4-6倍量的乙酸乙酯，加热至45_50°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用2-3倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱2-3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱6-12个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量2-5倍的无水乙醇,在0-5°C静置12-24小时,过滤,滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量小于等于4.5%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为10-12Mpa，萃取温度为45-55°C，分离釜的压力为4.0-5.0Mpa，温度为30_40°C;萃取时间为2-3小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料。 [0013]上述所述的中药药物原料制备的药物制剂。 [0014]上述所述的药物制剂为口服制剂。 [0015]上述所述的药物制剂为注射制剂。 [0016]上述所述的口服制剂包括片剂、胶囊剂或颗粒剂。 [0017]上述所述的注射制剂为注射液。 [0018]上述所述的注射液包括中药药物原料、无水乙醇和聚乙二醇400。 [0019]上述所述的注射液包括中药药物原料15-25重量份、无水乙醇150-160重量份和聚乙二醇400850-912重量份。 [0020]上述所述的注射液的制备方法为: [0021]取聚乙二醇400加入无水乙醇中，混合完全，得到混合溶剂，取2 / 3体积量的混合溶剂，加入药物原料，溶解完全，加入剩余的混合溶剂，搅拌均匀，过滤，灌装、灭菌，即得。 [0022]上述所述的中药药物原料在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。 [0023]上述所述的中药药物原料在制备治疗/预防脑梗塞药物中的应用。 [0024]上述所述的中药药物原料在制备治疗冠心病心绞痛药物中的应用。 [0025]本发明银杏叶提取物符合中国药典(2010年版，一部)“银杏叶提取物”的质量标准(392-393页)，其检测方法为药典方法。 [0026]本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，根据本发明所要保护的技术方案，进行的结论性试验。 [0027]一、稳定性试验 [0028]1、试验方案 [0029]试验方案1:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量26.8%，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计7.2 % )，加入5倍量的乙酸乙酯，加热至48°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用2.5倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱2.5个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱10个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量3.5倍的无水乙醇，在2°C静置18小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量3.0 %，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为llMpa，萃取温度为50°C，分离釜的压力为4.5Mpa，温度为35°C ;萃取时间为2.5小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量97.0%，银杏内酯A含量2.8%,总杂质含量3.0%， 按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】；(总银杏酸含量为l.Sppm)。 [0030]试验方案2:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量27.9 %，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计7.9% )，加入4.5倍量的乙酸乙酯，加热至45°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用3倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱11个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量4.5倍的无水乙醇，在0°C静置12小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量4.0%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为lOMpa，萃取温度为55°C，分离釜的压力为4.0Mpa，温度为30°C ;萃取时间为3小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量98.5%，银杏内酯A含量1.1 %，总杂质含量1.5%，按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】；(总银杏酸含量为1.7ppm)。 [0031]试验方案3:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量26.8%，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计6.7 % )，加入5.5倍量的乙酸乙酯，加热至48 V，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用2.5倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱7个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量3倍的无水乙醇，在5°C静置24小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量5.0%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为10.5Mpa，萃取温度为48°C，分离釜的压力为4.5Mpa，温度为35°C;萃取时间为2小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量96.5%，银杏内酯A含量3.0%，总杂质含量3.5 %，按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】；(总银杏酸含量为1.9ppm)。 [0032]试验方案4:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量25.5 %，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计6.3% )，加入4倍量的乙酸乙酯，加热至46°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用3倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱2-3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱8个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量2.5倍的无水乙醇，在2°C静置16小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量4.8%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为llMpa，萃取温度为48°C，分离釜的压力为4.5Mpa，温度为35°C;萃取时间为2小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量96.1%，银杏内酯A含量3.2%，总杂质含量3.9%，按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】；(总银杏酸含量为1.8ppm)。 [0033]试验方案5:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量26.4%，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计8.9 % )，加入5倍量的乙酸乙酯，加热至48°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用2.5倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱2.5个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去， 再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱10个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量4倍的无水乙醇，在:TC静置15小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量4.0 %，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为11.5Mpa，萃取温度为48°C，分离釜的压力为4.5Mpa，温度为35°C ;萃取时间为2.5小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量99.2%，银杏内酯A含量 0.5%,总杂质含量0.7%，按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】；(总银杏酸含量为1.4ppm)。 [0034]试验方案6:取银杏叶提取物(总黄酮醇苷含量26.4%，萜类内酯以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计8.6 % )，加入5倍量的乙酸乙酯，加热至48°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用3倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱10个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量4倍的无水乙醇，在4°C静置14小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量3.5%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为lOMpa，萃取温度为50°C，分离釜的压力为4.5Mpa，温度为35°C ;萃取时间为2.5小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料【原料中银杏内酯B含量99.6%，银杏内酯A含量0.3%，总杂质含量0.4%，按照中国药典(2010年版，一部)393页萜类内酯含量测定方法检测】;(总银杏酸含量为1.4ppm)。 [0035]上述银杏内酯B药物原料中总银杏酸的含量均小于2ppm。【检测方法按照中国药典(2010年版，一部)393页银杏叶提取物中总银杏酸的检测方法】 [0036]取上述不同试验方案原料20g,辅料无水乙醇155g和聚乙二醇400880g ;制备方法:取聚乙二醇400加入无水乙醇中，混合完全，得到混合溶剂，取2 / 3体积量的混合溶剂，加入药物原料，溶解完全，加入剩余的混合溶剂，搅拌均匀，过滤，灌装、灭菌，即得。 [0037]2、试验方法 [0038](I)光照试验:取不同试验方案原料制备的制剂，置于药品强光照射试验箱，于照度4500Lx±500Lx条件下放置10天，在第10天取样，检测，结果与O月数据相比较。 [0039](2)高温试验:取不同试验方案原料制备的制剂，置于小烧杯中，密封膜封口。将其置于电热鼓风干燥箱，在60°C 土 1°C条件下放置10天，于第10天取样检测，结果与O月数据相比较。 [0040](3)高湿试验:取不同试验方案原料制备的制剂，置于小烧杯中，分别置于盛有NaCl饱和溶液和KNO3饱和溶液的密闭干燥器，湿度条件分别为RH75%。将其分别置于电热鼓风干燥箱，在25°C ±1°C条件下放置10天，于第10天取样检测，结果与O月数据相比较。 [0041]3、检测方法 [0042]【含量测定】 [0043]照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定 [0044]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃:甲醇:水(10: 25: 75)为流动相；用蒸发光散射检测器检测(参考条件:漂移管温度:105°C;氮气或空气流速:2.9L / min)。理论塔板数按银杏内酯B峰计算应不低于2000。另取银杏内酯A对照品0.2mg,用Iml甲醇溶解，配制成0.2mg/ml的银杏内酯A对照溶液，注入液相色谱仪，供试品溶液与银杏内酯A对照品溶液主峰保留时间一致的色谱峰为银杏内酯A，供试品溶液主峰与 银杏内酯A峰的分离度应符合规定。 [0045]对照品溶液的制备精密称取银杏内酯B对照品(105°C干燥至恒重)适量，加甲醇制成Iml约含5mg的溶液，摇匀，即得。 [0046]供试品溶液的制备精密称取样品适量，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成Iml约含5mg的溶液，即得。 [0047]测定法分别精密吸取对照品溶液5μ 1、10μ 1，供试品10 μ I，注入色谱仪，测定，按照外标法计算C2tlH24Oltl的含量，即得。 [0048]【有关物质】 [0049]照含量测定项下的方法，取样品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每Iml含5mg的溶液⑴；精密量取溶液(1)0.3ml，用甲醇稀释成10ml，制成每Iml含0.15mg的溶液(2)。用含量测定项下的色谱条件和溶液，取10 μ I注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分色谱峰高度达记录仪的满标度；再分别取溶液(I)和(2)各10μ 1，进样。记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。 [0050]4、试验结果: [0051](I)含量及有关物质检测见表1-3 [0052]表1光照试验结果 [0053] 【权利要求】 1.一种中药药物原料，其特征在于中药药物原料中银杏内酯B含量大于等于97.0%小于100%，银杏内酯A含量大于等于0.5%小于3%。 2.根据权利要求1所述的一种中药原料，其中中药药物原料中银杏内酯B含量大于等于97.0 %小于100 %，银杏内酯A含量大于等于2.0 %小于3 %。 3.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料，其特征在于中药药物原料制备成药物制剂。 4.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料，其中中药药物原料的制备方法为: 取银杏叶提取物，加入4-6倍量的乙酸乙酯，加热至45-50°C，搅拌2小时，提取3次，合并提取液，过滤，滤液浓缩得浸膏，用2-3倍量的乙酸乙酯洗涤，洗涤后的浸膏上硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1溶剂，洗脱2-3个柱体积，洗脱液回收溶剂弃去，再用石油醚-乙酸乙酯体积比为15: 85溶剂洗脱，洗脱6-12个柱体积，收集洗脱液，回收溶剂至尽，干燥，加入干燥物重量2-5倍的无水乙醇，在0-5°C静置12-24小时，过滤，滤液回收乙醇至尽，固体干燥，干燥物含水量小于等于4.5%，放入CO2超临界萃取仪中，萃取釜压力为10-12Mpa，萃取温度为45-55°C，分离釜的压力为4.0-5.0Mpa，温度为30_40°C ;萃取时间为2-3小时，保留萃取釜原料，得到中药药物原料。 5.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料，其特征在于中药药物原料制备的药物制剂。 6.根据权利要求3所述的一种中药药物原料，其中药物制剂为口服制剂。 7.根据权利要求3所述的一种中药药物原料，其中药物制剂为注射制剂。 8.根据权利要求 6所述的一种中药药物原料，其中口服制剂包括片剂、胶囊剂或颗粒 剂。 9.根据权利要求7所述的一种中药药物原料，其中注射制剂为注射液。 10.根据权利要求9所述的一种中药药物原料，其中注射液包括中药药物原料、无水乙醇和聚乙二醇400。 11.根据权利要求10所述的一种中药药物原料，其中注射液包括中药药物原料15-25重量份、无水乙醇150-160重量份和聚乙二醇400850-912重量份。 12.根据权利要求11所述的一种中药药物原料，其中注射液的制备方法为: 取聚乙二醇400加入无水乙醇中，混合完全，得到混合溶剂，取2 / 3体积量的混合溶剂，加入药物原料，溶解完全，加入剩余的混合溶剂，搅拌均匀，过滤，灌装、灭菌，即得。 13.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。 14.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料在制备治疗/预防脑梗塞药物中的应用。 15.根据权利要求1或2所述的一种中药药物原料在制备治疗冠心病心绞痛药物中的应用。 【文档编号】A61P9/00GK103739612SQ201310727556 【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日 【发明者】朱吉满 申请人:哈尔滨誉衡药业股份有限公司。