【原】重组质粒的诱导表达——表达宿主菌及诱导表达

1.表达宿主菌的选择

大肠杆菌常用的表达宿主菌有E.ColiBL21(DE3),E.ColiRossatta(DE3),E.ColiBL21(DE3)Condon Plus。针对特殊的目标蛋白其所需要的宿主菌也不相同，每种宿主菌的基本特征可在本网站查询，福因德生物可提供表中所列菌种的感受态细胞，如需更多信息可联系福因德技术部门。

货号	产品名称	规格	产品特点与应用
MCC0010	E.coli DH5α感受态细胞	100μl×10	实验室最常用的感受态细胞，转化效率高，可用于蓝白斑筛选。
MCC0010S	E.coli DH5α超级感受态细胞	100μl×10	主要用于文库的构建；超高的转化效率，可达107cfu/μg。
MCC0020	E.coli BL21(DE3)   感受态细胞	100μl×10	λDE3溶原菌，带有T7   RNA聚合酶，可用于表达T7启动子控制的目的基因，也可以表达大肠杆菌启动子lac、tac、trc及trp控制的基因。
MCC0030	E.coli   BL21(DE3)plysS感受态细胞	100μl×10	除了具有BL21(DE3)优势外，PlysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达,所以适合表达毒性蛋白。
MCC0050	E.coli   Rosetta(DE3) 感受态细胞	100μl×10	补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
MCC0040	E.coli BL21(DE3)   Condon Plus感受态细胞	100μl×10	用于原核表达,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA，AUA，CCC，CUA)；提高富含AT-或   GC-的真核基因在原核系统中的表达水平

2．优化表达条件

表达条件(包括IPTG浓度、诱导温度和和诱导时间等)的优化（可参照以下的正交图设计实验），主要是为了提高蛋白产量/提高可溶性蛋白表达比例；选用不同诱导时长主要是为了选择最佳收获时间（时间短了，蛋白产量不够；时间长了，大量蛋白降解）；温度诱导主要是为了得到可溶性表达的蛋白，很多的蛋白即使低温诱导也不能实现可溶性表达，一定要实现可溶性表达尽可能选择促溶标签/调整IPTG浓度，使翻译速度放缓有充分时间折叠。福因德生物技术团队研发的自诱导培养基（Frdbio T7表达自诱导培养基即用型，PER0011）就是充分利用此原理，对表达在包涵体状态的蛋白优化为上清可溶表达状态的成功率高达60%。可溶性表达的策略在“蛋白可溶性表达的解决方案”中有详细的阐述。