认识EB病毒

在肿瘤发病高危因素方面，EB病毒与鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤等肿瘤关系密切。

EB病毒可以引起很多疾病，本文只介绍肿瘤相关。

EB病毒简介

ＥＢ病毒（EBV）为疱疹病毒科，疱疹病毒IV型，是一种嗜人类淋巴细胞的疱疹病毒。 

ＥＢＶ 是双链 ＤＮＡ 病毒，基因组长约172ｋｂ，在病毒颗粒中呈线性分子，进入受感染细胞后，其ＤＮＡ 发生环化并能自我复制。 淋巴细胞中潜伏感染的 ＥＢＶ 可表达２ 种不翻译成蛋白质的 ＲＮＡ（ＥＢＥＲｓ ）， 包 括 ＥＢＥＲ１ 和ＥＢＥＲ２;６ 种 核 抗 原 （ ＥＢＮＡ１、 ＥＢＮＡ２、 ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ、ＥＢＮＡ３Ｃ 和 ＬＰ）;２ 种潜伏期膜蛋白（ ＬＭＰ），包括 ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ／ Ｂ。

ＥＢＶ 在人群中感染非常普遍，约 ９０％ 以上的成人血清 ＥＢＶ 抗体阳性。

ＥＢＶ 还是一种致肿瘤病毒，与许多肿瘤的发生相关，如霍奇金淋巴瘤,非霍奇金淋巴瘤，鼻咽癌，胃癌和移植后淋巴细胞增殖症等。

ＥＢＶ 原发感染后建立终身潜伏感染。 

ＥＢＶ 潜伏感染可分为四种类型。 

在健康的 ＥＢＶ 既往感染个体，ＥＢＶ 在记忆性 Ｂ 细胞潜伏，只表达 ＥＢＥＲｓ，称为 ＥＢＶ 潜伏感染 ０ 型，这些个体称为健康携带者。

在 ＥＢＶ 感染相关疾病中，ＥＢＶ 有三种潜伏感染类型。 

潜伏感染 Ⅰ 型， 除 ＥＢＥＲｓ 外， ＥＢＶ 只表达ＥＢＮＡ１ 和 ＢａｍＨＩ Ａ 右侧片段（ＢＡＲＴｓ），如 Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤；

潜伏感染Ⅱ型，ＥＢＶ 表达 ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＴＳ 和 ＥＢＥＲｓ，如鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤；

潜伏感染Ⅲ型，ＥＢＶ 表达所有的潜伏感染基因，如免疫抑制病人的淋巴组织增生性疾病.

EBV相关性肿瘤疾病

鼻咽癌（ＮＰＣ）：

ＮＰＣ 是目前最为明确的与 EＢＶ 感染相关的人类上皮性肿瘤，位列中国肿瘤发病率前 １０位，尤其在两广等南方地区发病率最高，故又被称为“广东癌”。 

在流行地区，ＷＨＯ ＩＩＩ 型非角质化未分化（主要亚型）ＮＰＣ 肿瘤组织中几乎全部可以检测到 ＥＢＶ 基因组  。

ＥＢＶ 特异性抗体检测：

ＥＢＶ 相关 ＮＰＣ 患者抗体检测结果为 ＥＢＶ 既往感染或再激活。 抗ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 已经被证实是有助于 ＮＰＣ 筛查诊断的一个生物标志物。 

Ｃｈｅｎ 等 最近的一项荟萃分析结果表明，血清抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 用于 ＮＰＣ 诊断的敏感性和特异性可达到 ８３％和 ８８％。 研究结果也同时提示，如果同时检测其他抗体如抗 Ｒｔａ⁃ＩｇＧ、抗 ＥＢＮＡ１⁃ＩｇＡ等则效果更好。 并且，与免疫荧光法和酶联免疫吸附法相比，免疫酶法检测抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 用于 ＮＰＣ 诊断的准确性更好。

ＥＢＶ 核酸载量检测：

最新的研究结果显示，血清／ 血浆 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 可以用于 ＮＰＣ 的筛查，尤其是对于无症状早期 ＮＰＣ 病例，可能比 ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 指标的敏感性更高；并且血浆 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 还可用于ＮＰＣ 患者治疗后的监测以及预后判断 。

ＥＢＥＲｓ 原位杂交：

肿瘤细胞中 ＥＢＥＲｓ 阳性，可以明确 ＮＰＣ 与 ＥＢＶ 相关。

淋巴瘤：

ＥＢＶ 相关淋巴瘤主要包括 ＨＬ 和ＮＨＬ，其中经典 ＨＬ 中的混合细胞型，ＮＨＬ 中的Ｂｕｒｋｉｔｔ 淋巴瘤（非洲）以及结外 ＮＫ／ Ｔ 细胞淋巴瘤（鼻型）与 ＥＢＶ 密切相关。

ＥＢＶ 特异性抗体检测：

ＥＢＶ 相关淋巴瘤患者抗体检测结果为 ＥＢＶ 既往感染或再激活。

ＥＢＶ 核酸载量检测：

血清／ 血浆 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 可作为 ＥＢＶ 相关淋巴瘤患者肿瘤负荷的一个标志 物， 并 且 可 能 用 于 治 疗 效 果 评 估 和 预 后判断 。

ＥＢＥＲｓ 原位杂交　肿瘤细胞中 ＥＢＥＲｓ 阳性，可以明确淋巴瘤与 ＥＢＶ 相关。

EBV感染实验室诊断方法

ＥＢＶ 特异性抗体检测

原发性 ＥＢＶ 感染过程中首先产生针对 ＶＣＡ 的 ＩｇＭ和 ＩｇＧ（抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ／ ＩｇＧ）；在急性感染的后期，抗 ＥＡ⁃ＩｇＧ 出现；在恢复期晚期，抗 ＥＢＶ 核抗原（ＥＢＮＡ）ＩｇＧ产生。 目前主要用于实验室检测的是上述三种。

另外，抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 和抗 ＥＡ⁃ＩｇＡ 阳性提示持续性ＥＢＶ 抗原刺激，常用于 ＣＡＥＢＶ 或 ＥＢＶ 相关肿瘤的诊断和监测。

抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ 抗体亲和力的检测可帮助鉴别 ＥＢＶ 原发感染和既往感染.。

临床意义：对于免疫功能正常的患者，一般情况下结合抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ、抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ 和抗 ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ ３ 个抗体的检测结果可以区分 ＥＢＶ 原发感染和既往感染：抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ、抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ 抗体阳性而抗ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ 阴性提示 ＥＢＶ 原发感染，抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ 阴性而抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ 和抗 ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ 阳性则是典型的ＥＢＶ 既往感染抗体类型。 但有的病例抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ 产生延迟，有的则缺失或长时间存在，并且 ＥＢＶ 再激活时也可能出现抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ，抗ＶＣＡ⁃ＩｇＭ 有时也会出现假阳性（如人巨细胞病毒感染时），４ 岁以下儿童抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ 水平低且持续时间短；抗 ＥＡ⁃ＩｇＧ 在原发感染后期出现，少数病例可能在原发感染后长时间检出，并且 ＥＢＶ 再激活时也可能出现抗 ＥＡ⁃ＩｇＧ；约 ５％ 的健康携带者缺失抗ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ 抗体，另外免疫抑制患者抗 ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ 抗体也可能会丢失或水平很低；有的既往感染过 ＥＢＶ的患者抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ 可能为阴性；鼻咽癌患者ＶＣＡ⁃ＩｇＡ 和 ＥＡ⁃ＩｇＡ 抗体滴度明显高于健康携带者。因此 ＥＢＶ 感染后血清学反应复杂多样，有时给抗体结果解释尤其是单份血清的抗体结果解释带来困难。

根据 ＥＢＶ 感染过程中抗体产生的不同动力学特点，同时检测患者血清中几种 ＥＢＶ 抗体（抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＭ／ ＩｇＧ、抗 ＥＡ⁃ＩｇＧ 及抗 ＥＢＮＡ⁃ＩｇＧ）和抗 ＶＣＡ⁃ＩｇＧ亲和力可以提高诊断原发性 ＥＢＶ 感染的敏感性和特异性  ，帮助判断原发性 ＥＢＶ 感染、既往 ＥＢＶ 感染或既往 ＥＢＶ 感染再激活。

嗜异凝集抗体检测

嗜异凝集抗体为 ＩｇＭ 抗体，在病程第 １ ～２ 周出现，在病程 ５ 周内达到高峰，随后迅速下降，但是少数患者可以持续约 ６ ～ １２ 个月。 在成人和青少年，８５％ ～９０％ 原发性 ＥＢＶ 感染者会出现嗜异凝集抗体；但是大约只有 ５０％的 ２ ～５岁儿童原发性 ＥＢＶ 感染后此抗体为阳性，而小于 ２岁的儿童原发性 ＥＢＶ 感染后此抗体的阳性率仅１０％ ～３０％ 。

临床意义：此抗体检测缺乏特异性，其他急性感染如原发性巨细胞病毒感染、自身免疫性疾病或肿瘤等也可能呈阳性反应  。 国内儿童 ＩＭ 的发病高峰年龄为 ４ ～６ 岁，因此该抗体检测在国内儿童 ＩＭ 的诊断中价值不大  。 因此，不推荐用于国内儿童 ＥＢＶ 原发性感染所致 ＩＭ 的诊断。

ＥＢＶ 核酸载量检测　

ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 载量测定（最常用的标本是外周血）已经被广泛应用于 ＥＢＶ 相关疾病的诊断、病情监测、治疗效果评估和预后判断等。 无菌体液（如肺泡灌洗液、脑脊液等）样本也可检测 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ，用于 ＥＢＶ 相关疾病的辅助诊断。

临床意义：不同临床样本中 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 检测结果的意义不同。 血清或血浆中 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 阳性提示患者体内存在活动性 ＥＢＶ 感染或疾病与 ＥＢＶ 密切相关，需结合临床表现及其他检查结果综合分析判断；血清或血浆ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 阴性提示为血清阳性转化的 ＥＢＶ 健康携带者、未感染过 ＥＢＶ 的患者、非 ＥＢＶ 相关疾病患者、以及部分 ＥＢＶ 相关疾病患者，如部分 ＩＭ 患者及ＩＭ 后期，极少数 ＣＡＥＢＶ 患者。外周血 ＰＢＭＣ 中 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 载量高于 １０2.５ 拷贝／ μｇＤＮＡ 是 ＣＡＥＢＶ 的诊断标准之一。 全血样本 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 载量主要用于免疫缺陷患者 ＥＢＶ 感染的诊断，以提高诊断 ＥＢＶ 感染的敏感性不推荐用于有免疫力的患者。 因血清 ＥＢＶ 阳性转化的健康携带者每 １０ ６ 个 ＰＢＭＣ 中大约有 １ ～ ５０ 个 ＥＢＶ 感染的细胞， 约 ７ 个拷贝 （１ ～ ３０ 个 拷 贝） ＥＢＶ⁃ＤＮＡ／１０ ６ ＰＢＭＣ 。 因此，血清阳性转化的 ＥＢＶ 健康携带者的全血或 ＰＢＭＣ 标本中可能检出低水平的 ＥＢＶ⁃ＤＮＡ 载量。

ＥＢＥＲｓ 原 位 杂 交 试 验 　 

ＥＢＥＲｓ 是 ＥＢＶ 编码的不翻译成蛋白质的 ＲＮＡ。

ＥＢＥＲｓ 大量存在于 ＥＢＶ 潜伏感染的细胞中，每个细胞可达１０ ６ ～１０ ７ 拷贝，是 ＥＢＶ 潜伏感染的最好标志物，其主要功能是抑制干扰素介导的抗病毒效应和凋亡。

临床意义：原位杂交检测 ＥＢＥＲｓ 能够定位ＥＢＶ 感染的细胞类型，是明确肿瘤与 ＥＢＶ 相关的金标准。

本文参考文献：ＥＢ 病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识，来源：中华实验和临床病毒学杂志 ２０１８ 年 ２ 月第 ３２ 卷第 １ 期作者：全国儿童 ＥＢ 病毒感染协作组　中华实验和临床病毒学杂志编辑委员会。本文由小编编辑，版权归原作者，本文仅作学习交流用。