|
1．原理 Hoechst 33258和Hoechst 33342均为非嵌人性荧光染料。它们在活细胞中 DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合。 活细胞或固定细胞均可从低浓度溶液中 摄取该染料。从而使细胞核着色。故又把此类染料称为DNA探针。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechsr-DNA的激发和发射波长分别550nm和460nm。在荧光显微镜紫外光激发时，Hoechst-DNA发出亮蓝色荧光。 2．溶液的配制 (1)Hoechst 33258储存液 Hoechst 33258 lmg 0．01mol／LPBS(pH 7．4) 5ml (2)Hoechst 33258工作液(终浓度为0．5ug／ml) Hoechst 33258浓缩液 125ul 0．01mol／LPBS(pH 7．4) 50ml 3．操作程序 (1)细胞悬液或培养单层细胞等标本，用醋酸―乙醇或Carnoy固定液固定； (2)0．01mol／LPBS漂洗5分钟； (3)Hoechst 33258工作液染色，室温15分钟； (4)0．01mol／LPBS漂洗3次，每次5分钟； (5)用甘油与PBS比例为1：9的混合液或水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。 结果：该染料为DNA的特异性荧光探针，细胞核呈亮蓝色荧光 |
|
|
