问：沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）上会不会生长细菌？答：SDA不是选择性培养基，而是一种广谱的增菌培养基，pH范围5.4-5.8，某些细菌是可以在SDA上生长的，霉菌和酵母菌总数计数时SDA上生长的菌均应计入霉菌和酵母菌总数；或者可以经过评估选择含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰红钠琼脂培养基进行霉菌和酵母菌总数计数。 问：琼脂培养基为什么需要倒置培养？ 答：在进行微生物培养时，若正置培养，琼脂培养基中的水分易蒸发使平板干裂，不利于微生物的生长；同时水蒸汽会在平皿盖上形成冷凝水，若回落在培养基表面，会使菌落蔓延生长，无法计数，若冷凝水太多会使培养基与平皿分离，容易滑动倒置培养可减少培养基表面的空气流动，减慢培养基中水分蒸发的速度，充分维持弹性，有利于菌株的生长和繁殖，防止空气中杂菌对培养基及培养物造成污染；也会由于重力作用在一定程度上使营养物质沉积到培养基表面，有利于微生物利用营养物质；倒置的平板方便拿取，避免环境中杂菌的污染。中国药典2015版1105中关于平皿法（倾注法）有明确要求。 需要注意的是，《食品安全国家标准 食品微生物学检验霉菌和酵母计数》（GB4789.15-2016）是要求正置培养，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影响计数结果。 问： 中国药典2015版要求霉菌和酵母菌平皿计数时培养5-7天，那么培养5天可以么？ 答：微生物限度检查中霉菌和酵母菌培养时间5-7天，因不同的霉菌酵母菌生长特性不同，所以具体培养时间，由企业根据各自情况（基于风险评估）自行确定。 问：中国药典2015版要求霉菌和酵母菌平皿计数时培养5-7天，该如何计数？ 答：但是在实际操作中，我们会发现如果样品中存在霉菌，培养到第5-7天时，可能菌落之间已经融合，并蔓延生长至整个平皿，此时的霉菌已经无法计数。建议霉菌和酵母菌检测时，第三天计一次数，培养结束时计一次数，比较两组数据，以多者为最终结果。 霉菌和酵母菌检测培养过程中，避免频繁取拿观察，尽量避免振动等，防止孢子扩散。 问：药企的环境检测应该依据那个标准？答：关于环境检测，2015版《中国药典》的9205和GB/T16294-2010《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》都有规定，且一些细节略有差别。其中国标的规定更为具体，建议实际操作中以国标为准，药典可以做为参考。 问：一些不常用的培养基开瓶后在效期内较长时间没有用完，那么这些开瓶后的培养基需要进行复验吗？ 答：开瓶后的培养基，如果长时间不使用，还在效期内，建议开瓶后间隔1年进行复验。如果出现结块，则不能使用。同理，如果同一批次一次购买量较多，一年内未使用完，也建议进行复检。 问：薄膜过滤法，滤膜边缘长了一圈菌，原因有哪些？ 答：出现这个现象，可能的原因（常见）包括以下三个方面： （1）滤杯：无论是一次性的滤杯还是反复灭菌的滤杯，理论上都是无菌的，但是不排除滤杯灭菌不彻底和使用时操作人员与滤杯底部接触，污染滤杯的可能。 （2）微限仪的滤头：微限仪滤头如果在更换滤膜的过程中灭菌不彻底，上一个样品可能会污染下一批滤膜，如果微限仪长时间不灭菌，或使用的滤膜破损，都可能使微限仪内部管道带菌，在泵开启的瞬间形成气溶胶，污染滤头。 （3）转移过程中被污染：在滤膜由滤头转移至平皿的过程中，镊子灭菌不彻底，操作者手不稳使滤膜和仪器，台面，平皿，身体发生过接触。 具体问题具体分析，如果出现这样的问题，需要根据实验室的实际情况具体分析。 问：控制菌检查法中用到的培养基，在做培养基适用性的时候，其中有“指示特性”的表述，那么“指示特性”是指的什么意思？答：培养基指示特性包括菌落大小、形态特征、指示剂反应情况（菌落颜色变化）等。例如大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂培养基上桃红色菌落有沉淀环、乙型副伤寒沙门菌在XLD有黑心等。 问： 无菌检查法用到的培养基（FTM和TSB）进行培养基适用性检查的时候需不需要使用对照培养基？ 答：在2015版《中国药典》无菌检查法通则1101中，并没有强制规定灵敏度检查需要使用对照培养基，所以不使用对照培养基也是可以的。但是国家有FTM和TSB的对照培养基，建议在做FTM和TSB的培养基适用性时，使用对照培养基进行参比。 问： 生孢梭菌如何计数？ 答：（1）使用用硫乙醇酸盐流体培养基，在培养16-18小时这个时间进行观察，计数，计数前不要摇晃，培养时间太长，培养基将浑浊，点计不清；（2） 使用哥伦比亚琼脂培养基，浇注或涂布后，置厌氧罐（袋）里，再置培养箱培养，计数。 |
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