治疗盆腔炎的药物组合物及其用途（专利）

一种治疗盆腔炎的药物组合物及其用途 【专利摘要】本发明提供了一种治疗盆腔炎的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂：金刚藤总黄酮提取物10-20份、金刚藤多糖提取物1-5份；所述金刚藤多糖提取物中多糖含量大于20%w/w。本发明还提供了该提取物的制备方法和用途。本发明还提供了基于该提取物的治疗盆腔炎的组合物等。本发明研究发现，将金刚藤多糖与金刚藤总黄酮提取物配伍使用后，其抗炎、增强免疫、活血化瘀等药效活性更强，对盆腔炎有更为良好的治疗作用，为临床用药提供了新的选择。 【专利说明】一种治疗盆腔炎的药物组合物及其用途 【技术领域】 [0001]本发明涉及一种治疗盆腔炎的药物组合物及其用途。 【背景技术】 [0002]随着人们生活节奏的加快，经济水平的提高，人们对生活质量的要求也越来越高。某些慢性疾病不会直接导致生命危险，但由于病情长时间的缠绵不愈、反复发作，也会给人们的生活带来不便和不适，慢性盆腔炎就是这类疾病之一，慢性盆腔炎(chronic pelvicinflammatory disease,CPID)是指女性生殖器官、周围结缔组织及盆腔腹膜所发生的慢性炎症，是育龄期妇女最常见的生殖器宫炎症之一，具有病程长、病情复杂、复发率高等特点。慢性盆腔炎会导致不孕、宫外孕、异位妊娠、其它妇科炎症，并影响家庭生活。 [0003]金刚藤Smilax scobinicaulis C.H.Wright (《西藏常用中草药》)，始载于《名医别录》，云:“菝葜，生山野，二月，八月采根，暴干”，“主腰背寒痛，风痹，益血气，止小便利。“《本草纲目》:〃治消渴，血崩，下利”。 [0004]目前研究者均认为，金刚藤治疗妇科炎症有效成分主要集中在皂苷类和黄酮类两大部位，治疗的病症主要为妇科炎症、附件炎、炎性包块。而现代金刚藤药材的研究也局限于对黄酮和皂苷的纯化工艺(如专利申请号:200810030463.7，其实施例2制备了一种总黄酮含量为56%的菝葜提取物)，以及将已有的两种有效成分加工为不同的制剂，在金刚藤相关专利中不难发现各种制剂的物质基础仅有皂苷类和黄酮类两类(如专利申请:200610020853.7)，制剂却千变万化，现已有胶囊剂、软胶囊剂、片剂、缓释片、咀嚼片等。 [0005]目前还未见对金刚藤多糖类成分的相关报道，更未见将金刚藤多糖类成分与总黄酮提取物进行复配的报道。  【发明内容】  [0006]本发明的目的在于提供一种治疗盆腔炎的组合物及其用途。 [0007]本发明提供了一种治疗盆腔炎的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂: [0008]金刚藤总黄酮提取物10-20份、金刚藤多糖提取物1-5份；所述金刚藤多糖提取物中多糖含量大于20%w/w。 [0009]进一步地，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂: [0010]金刚藤总黄酮提取物15份、上述的金刚藤多糖提取物3份。 [0011]其中，所述金刚藤多糖提取物中，多糖含量为40~95%w/w，优选为40~60%w/w，更优选为40~50%w/w。 [0012]其中，所述金刚藤多糖提取物的制备方法包括如下操作步骤: [0013]( I)取金刚藤，采用有机溶剂提取即可，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、石油醚、乙醚、丙酮、正己烷、氯仿中的一种或两种以上的混合溶剂； [0014](2)脱脂后的金刚藤经水提醇沉，沉淀干燥，即得金刚藤多糖提取物。[0015]进一步地，步骤(1)中，所述有机溶剂为乙醇，乙醇浓度为70-95%v/v，优选为75~80%v/V 乙醇。 [0016]进一步地，步骤(2)具体操作如下:取药渣，挥干溶剂，加水提取，合并提取液，离心,取上清液,浓缩后,加入乙醇至含醇量为70~80%v/v，低温静置，离心，收集沉淀，干燥，即得金刚藤多糖提取物。 [0017]更进一步地,步骤(2)中，上清液浓缩至0.3~0.5g生药/ml ；95%乙醇加入体积为浓缩液体积的4倍以上。 [0018]优选地，步骤(1)的具体操作为:称取金刚藤药材100g，加入8倍量的75%v/v乙醇回流提取3次，提取时间分别为2h、2h、lh，滤过，将药渣挥干溶剂，再加入12倍量的水，80°C提取2次，每次提取2，合并水提液，离心，将上清液减压浓缩至药液浓度为0.4g生药/ml ； [0019]步骤(2)的具体操作为:浓缩液中加入4倍量95%v/v乙醇，充分混合，4°C静置过夜，4000r/min离心10min,收集沉淀,50°C减压干燥，即得金刚藤多糖提取物。 [0020]其中，本发明所述金刚藤总黄酮提取物可以采用目前已知的黄酮含量在50%w/w以上的金刚藤提取物，如专利申请号:200810030463.7的实施例2，就提供了一种总黄酮含量为56%的菝葜提取物。 [0021]本发明所述金刚藤总黄酮提取物中黄酮含量在50%w/w以上；优选地，所述金刚藤总黄酮提取物中，黄酮含量为50%~60%w/w。 [0022]进一步地，所述金刚藤总黄酮提取物是由如下方法制备得到的: [0023]A、称取金刚藤药材，加入70~80%v/v乙醇提取，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇后，浓缩液备用； [0024]B、浓缩液上中极性大孔吸附树脂，依次用蒸馏水、65~75%v/v乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥即得金刚藤总黄酮。 [0025]优选地，步骤A中，乙醇浓度为75%v/v ;步骤B中，大孔吸附树脂为DlOl，洗脱用乙醇浓度为70%v/v。 [0026]本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗盆腔炎或抗炎、增强免疫、活血化瘀的药物中的用途。 [0027]本发明研究发现，将金刚藤多糖与金刚藤总黄酮提取物配伍使用后，其抗炎、增强免疫、活血化瘀等药效活性更强，对盆腔炎有更为良好的治疗作用，为临床用药提供了新的选择。 [0028]另外，本发明组合物所用多糖提取物和总黄酮提取物出膏率较低，明显降低了金刚藤类药物的每日服药量，更便于患者使用。 【专利附图】  【附图说明】 [0029]图1提取时间对出膏率及提取液中多糖浓度的影响 [0030]图2提取次数对出膏率及多糖浓度的影响 [0031]图3固液比对出膏率及提取液中多糖总量的影响 [0032]图4提取温度对出膏率及多糖含量的影响 [0033]图5正常大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0034]图6正常大鼠子宫病理形态(HE染色，100 X)[0035]图7模型组大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0036]图8模型组大鼠子宫病理形态(HE染色，100 X) [0037]图9阳性组大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0038]图10阳性组大鼠子宫病理形态(HE染色，100X) [0039]图11多糖组大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0040]图12多糖组大鼠子宫病理形态(HE染色，100 X) [0041]图13黄酮组大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0042]图14黄酮组大鼠子宫病理形态(HE染色，100 X) [0043]图15混合物组大鼠子宫病理形态(HE染色，200 X) [0044]图16混合物组大鼠子宫病理形态(HE染色，100 X) 【具体实施方式】 [0045]实施例1金刚藤多糖提取物的制备 [0046]称取金刚藤药材100g，置于2000ml圆底烧瓶中，加入8倍量的75%乙醇溶液，浸泡过夜，水浴加热回流提取2h，滤过，再加入8倍量75%乙醇回流提取2h，滤过，再加入8倍量的75%乙醇回流提取lh，滤过，将残渣挥干溶剂，再加入12倍量的水，80°C水浴加热回流提取2h，滤过，再加入12倍量的水，加热回流提取2h，再重复一次，滤过，合并提取液，离心，将上清液减压浓缩至250ml (即药液浓度为0.4g生药材/ml)。 [0047]将浓缩液中加入4倍量的95%乙醇，充分混合，4°C静置过夜，离心(4000r/min，lOmin)，收集沉淀，50°C减压干燥，研磨成粉末，即得金刚藤多糖提取物。经测定，该提取物中，多糖含量为41%。 [0048]实施例2金刚藤多糖提取物的制备 [0049]称取金刚藤药材，粉碎得40-80目金刚藤粗粉，用去离子水浸泡，金刚藤粗粉与去离子水的质量比为1:10-30，加碱调节P H值至7-10，再于微波条件下提取3-10min，微波功率300-800 W，过滤收集滤液，滤饼重复提取，共提取2-5次，合并每次的滤液收集为提取液；所得的提取液，加酸调节P H值至2-5，再加入1:2-4乙酸乙酯萃取，搅拌后静置、分层，保留收集下层，重复用乙酸乙酯萃取2-5次，合并所有的下层，收集为保留液；保留液用三氯乙酸溶液调节P H值至2-3，降低温度至4-10°C，搅拌、静置8-12 h后，离心，除去沉淀物，收集上清液；上清液超滤，至浓缩液中多糖质量浓度为5% -15%，超滤膜截留分子量为5000-10000 D，浓缩液中加入体积浓度为95% -100%乙醇水溶液至乙醇体积分数为70% -80%，降温至4-10°C，搅拌、静置12-18 h后，离心，收集沉淀物；沉淀物，经减压低温干燥、粉碎，即得金刚藤多糖提取物。经测定，该提取物中，多糖含量为95%。 [0050]实施例3金刚藤总黄酮提取物的制备 [0051] 称取100g金刚藤药材，加入8倍量75%乙醇浸泡过夜，水浴加热回流提取3次，时间为2h、2h、Ih,合并提取液,过滤,减压回收乙醇,至无醇味,用纯净水定容至250ml (即0.4g生药材/ml);上DlOl大孔吸附树脂，柱体积为250cm3，径高比为1:3，先用2BV的蒸馏水洗脱，再用3BV的70%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，50°C减压回收乙醇，至一定体积后，转入蒸发皿中，在水浴锅上将溶液挥发至近干，转入50°C减压干燥箱中干燥，干燥后，即得金刚藤总黄酮提取物。经测定，该提取物中黄酮含量为58.7%。[0052]上述总黄酮提取物方法也可参见专利申请号:200810030463.7。 [0053]实施例3金刚藤多糖部位提取的方法学考察 [0054]1.1仪器和试剂 [0055]紫外-可见分光光度计，型号:UV-1700，SHIMADZU C0P0RAT10N公司生产。 [0056]葡萄糖标准品(lOOmg，≥99%)，生产批号:P-012_110821，成都瑞芬思生物科技有 限公司生产。 [0057]苯酚(分析纯):成都市科龙化工试剂厂。 [0058]浓硫酸(98.8%，分析纯):成都市科龙化工试剂厂生产。 [0059]1.2方法与结果 [0060]1.2.1供试品溶液的配置 [0061]精密称取金刚藤药材30g，加入10倍80%乙醇水浴加热回流1.5h，滤过，滤渣挥干，加入10倍水加热回流1.5h，滤过将提取液减压回收溶剂至60ml，加入4倍量95%乙醇4°C沉淀过夜，离心，收集沉淀，50°C减压干燥，研磨成粉，精密称取该多糖粗粉30.22mg，用水溶解，定容至50ml，混匀，作为供试品溶液备用。1.2.2对照品溶液的配置 [0062]精密称取葡萄糖对照品溶液10.34mg，置100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，配置成0.1034mg/ml葡萄糖对照品溶液配用。 [0063]1.2.3显色方法 [0064]取一定体积待测样品溶液，加水至2ml，加入lml5%苯酚溶液，混匀，再迅速加入5ml浓硫酸,混匀,静置IOmin,在40°C水浴加热15min,冰水浴冷却5min,取出，在490nm处 测定吸光度。 [0065]1.2.4标准曲线的绘制 [0066]分别精密吸取葡萄糖对照品溶液0.50ml、060ml、0.70ml、0.80ml、0.90ml、1.0Oml置于IOml具塞试管中，用水定容至2ml，按2.2.3显色方法显色，测定吸光度，以对照品溶液浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。(?= 10.34/100=0.1034mg/ml [0067]表1葡萄糖对照品标准曲线 [0068] 【权利要求】 1.一种治疗盆腔炎的药物组合物，其特征在于:它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂: 金刚藤总黄酮提取物10-20份、金刚藤多糖提取物1-5份；所述金刚藤多糖提取物中多糖含量大于20%w/w。 2.根据权利要求1所述的药 物组合物，其特征在于:它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂: 金刚藤总黄酮提取物15份、上述的金刚藤多糖提取物3份。 3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于:所述金刚藤多糖提取物中，多糖含量为40~95%w/w，优选为40~60%w/w。 4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于:所述金刚藤多糖提取物的制备方法包括如下操作步骤: (1)取金刚藤，采用有机溶剂提取即可，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、石油醚、乙醚、丙酮、正己烷、氯仿中的一种或两种以上的混合溶剂； (2)脱脂后的金刚藤经水提醇沉，沉淀干燥，即得金刚藤多糖提取物。 5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于:步骤(1)中，所述有机溶剂为乙醇，乙醇浓度为70-95%v/v，优选为75~80%v/v乙醇。 6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于:步骤(2)具体操作如下:取药渣，挥干溶剂，加水提取，合并提取液，离心，取上清液，浓缩后，加入乙醇至含醇量为70~80%v/v，低温静置，离心，收集沉淀，干燥，即得金刚藤多糖提取物。 7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于:步骤(2)中，上清液浓缩至0.3~0.5g生药/ml ；95%乙醇加入体积为浓缩液体积的4倍以上。 8.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于:步骤(1)的具体操作为:称取金刚藤药材100gJPA 8倍量的75%v/v乙醇回流提取3次，提取时间分别为2h、2h、lh，滤过，将药渣挥干溶剂，再加入12倍量的水，80°C提取2次，每次提取2，合并水提液，离心，将上清液减压浓缩至药液浓度为0.4g生药/ml ； 步骤(2)的具体操作为:浓缩液中加入4倍量95%v/v乙醇，充分混合，4°C静置过夜，4000r/min离心10min,收集沉淀,50°C减压干燥，即得金刚藤多糖提取物。 9.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于:所述金刚藤总黄酮提取物中，黄酮含量在50%w/w以上；优选地，所述金刚藤总黄酮提取物中，黄酮含量为50%~60%w/w。 10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于:所述金刚藤总黄酮提取物是由如下方法制备得到的: A、称取金刚藤药材，加入70~80%v/v乙醇提取，合并提取液，过滤，滤液减压回收乙醇后，浓缩液备用； B、浓缩液上中极性大孔吸附树脂，依次用蒸馏水、65~75%v/v乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，干燥即得金刚藤总黄酮。 11.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于:步骤A中，乙醇浓度为75%v/v；步骤B中，大孔吸附树脂为DlOl，洗脱用乙醇浓度为70%v/v。 12.权利要求1~11任意一项所述药物组合物在制备治疗盆腔炎或抗炎、增强免疫、活血化瘀的药物中的用途。 【文档编号】A61K31/715GK103893473SQ201310737797 【公开日】2014年7月2日 申请日期:2013年12月27日 优先权日:2012年12月27日 【发明者】谭周菊 申请人:成都立力医药科技有限公司。