食品实验室服务 关于液质联用呢,对于菜鸟来说,似乎总有说不完的点,也总有各种新的疑问冒出来。为什么呢?因为你不通原理、仪器构造,不会举一反三。但如何做到?这只能靠自己,师傅讲太多,你不去用仪器、拆仪器,仍白搭,所以,多学学、多用用、多想想、多拆拆就是玩转仪器的必备秘诀啦。本帖只挑重点说,不让你错过任何一个关于液质的必备知识点。 液质联用到底是咋回事? 质量分析器的类型 了解LC-MS的接口也很重要 1.种类及发展: 1.传送带(moving belt)式的LC-MS: 目前已经停用 2.热喷雾(TSP) LC-MS接口: 已经很少使用 3.粒子束(PBI) 4.大气压电离源(API):目前最常用的方法 电喷雾(ESI)、大气压化学电离源(APCI)。 2.各接口应用范围
3.大气压电喷雾质谱应用范围
两种接口各有何不同? 正、负离子化模式的选择?
流动相的选择 流量和色谱柱的选择
辅助气体流量和温度的选择 【这些你知道吗?】 1、由于液质的流速较小(ESI一般为0.2ml/min),所以配置样品的溶剂强度不能太大,尽量小于起始比例,否则,会出现保留时间偏移等问题。 来自网友的忠告 1.前处理:样品一定要干净,不管是为了质谱还是为了保护柱子,生物样品提取的好些,如果直接沉淀,一定要注意,尽量高转速12000rpm以上,低温离心,最好离2次(保险一点),转移样品也要仔细,从中间慢慢吸,有时会有漂浮物。 2.样品浓度:质谱是灵敏度很高的仪器,进样浓度一定不能太高,1-2μg/ml已经可以啦,太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留,而且定量也会不准啦。
5.日常维护:注意用流动相HPLC级,水用超纯水,不含磷酸盐等缓冲液.防湿防尘(用除湿机各遮布).用UPS电源以防临时停电影响.样品分析后用异丙醇液清洗雾化室.此外,定期清洗雾化针和查看泵油液面等. 仪器状态正常时,最基本的维护 一般气源检查,总压力不能过大,检查泵油位置,查看真空度等,勤冲洗管路,特别是测完样品后多冲,离子源多清洗,泵油定期检查、更换,滤网及时更换清洗。 1.定期震气,更换机械泵油、滤网,必要时仪器除尘等。 液相部分: 质谱部分: 【一些注意事项】 9.其次电压不要加到极限,尤其是正负离子转换时要适当调整; 10.最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。 气质联用与液质联用的区别是什么?
应用领域: 菜鸟问答 首次使用液质,如下问题有疑问: 1、准备使用液质联用测量酿酒酵母胞内代谢物含量,现有的是C18柱子,请问,要测定氨基酸及一些小分子多肽还有有机酸,是否需要柱前衍生化,如果需要使用,那是用PITC,还是OPA或者其他的衍生剂?考虑价格毒性、定量准确性。 2、液质联用流动相一般用甲醇,乙腈就行吗?还需要在液相上实验分离条件吗?在另外的液相上,使用另外的C18,获得的实验流动相条件,可以用于液质吗? 3、最后物质的定量是由质谱图确定的吗?是不是每一种物质的绝对定量都需要加入标准品? 4、可否简要说明一下首次使用液质联用的步骤?比如先确定流动相组成,用各种标品混合物全扫描一次,等等。要自己做的,有经验的那种。 热心网友支招: 1 不用,但有可能要挑选C18柱子。 2 液质连用常用溶剂是甲醇,乙腈,水,其他溶剂的使用请参考柱子说明。尽量在LC系统完成分离,可用MS作为检测器(MS的作用相当于UV),做LCMS寻找合适的LC 分离条件。如果流速合适,LC系统允许,使用相同的C18柱子,LC条件可以直接用,但是进质谱需要分流或者调谐质谱达到最佳效果。 3 物质定量是由total ion chromatography的峰(使用peak area ratio)确定,需要加入internal standard(至少一种) 4 液质一般来说: a) 先直接单一样品(标样)进样,做MS full scan 确定母离子,做MS/MS 确定母离子/子离子对。 b) 每个标样做LCMS (SIM 或full scan 模式), 确定可以尽量在column上就可以分离所有的感兴趣的化合物。 c) 混合或单一标样进样做LCMS (MRM 模式,最终定量使用模式),调谐质谱,找到适合所有标样的质谱参数。 d) 混合样加内标做 LCMS, 确定内标的浓度。 e) 单一标样或混合加内标进样做LCMS (MRM 模式),找各标样的线性浓度范围。 f) 加一系列已知浓度的某一(或多个)标样(含内标)历经整个实验过程做标准样品曲线。 g) 背景样品(不加酿酒酵母胞内代谢物),实际样品 (加酿酒酵母胞内代谢物),标准曲线样品(加酿酒酵母胞内代谢物)同步制备,检测。 文章来源于网络,转载只为分享知识,如涉及版权问题,请与我联系 |
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