【原】免疫荧光/IF实验技术服务

【技术原理】

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

【实验流程】

【常见问题】

1、无/弱染色

      烤片温度过高，推荐56℃-60℃1-2h；
           一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。

2、非特异性背景染色

     是否灭活内源性过氧化物酶；
           孵育过程中干片；
           抗原热修复过度。

3、染色过深

     一抗浓度过高；
           染色试浓度过高或孵育时间过长；
           染色剂浓度过高或孵育时间过长。

【注意事项】

1、荧光染色后一般在1h内完成观察，或于4℃保存4h，时间过长，荧光可能会淬灭。

2、实验对照设置越多，结果越可信。