| 研究背景与目的:目前研究表明肝癌预后在一定程度上与肝癌细胞在缺氧微环境中生物学行为的改变密切相关。而缺氧微环境中肿瘤相关巨噬细胞(TAM)通过表达抑制性配体和分泌趋化因子对肿瘤细胞侵袭、免疫逃逸等方面具有重要作用。本研究通过深入探讨肝癌缺氧微环境中TREM-1调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的具体机制,进一步明确TREM-1+TAMs在肝癌免疫微环境中的作用;旨在指导临床制定和优化肝癌免疫治疗策略。研究方法:1、临床样本组织染色区分肝癌实质与间质缺氧程度,在肝癌缺氧组织区域确定TREM-1+TAMs定位,分布及浸润情况;观察TREM-1+TAMs周边浸润带,区域免疫细胞CD8+T细胞与FOXP3+Tregs的分布;同时评估肿瘤相关免疫细胞浸润与患者生存预后关系;2、模拟体外肝癌缺氧微环境,利用双荧光酶素双报告实验检测HIF-lα与TREM-1的调控关系3、构建TREM-1+巨噬细胞小鼠荷瘤模型,利用流式细胞学技术研究肿瘤内部CD8+T细胞免疫应答功能和凋亡状态,检测TAMs抑制性配体PD-L1表达水平。4、流式细胞学技术和蛋白印迹法检测TREM-1+TAMs趋化Tregs的相关机制。研究结果:1、TREM-1+TAMs广泛存在于肝癌缺氧微环境中并提示不良预后;2、HIF-lα诱导的TREM-1+TAMs能促进CD8+T细胞失功与免疫抑制,TAMs有高水平PD-L1表达;3、肿瘤内部的FOXP3+Treg一定程度上依赖于TREM-1+TAMs的积累,通过ERK/NF-Kβ/CCL20信号通路完成招募。结论:肝癌预后在一定程度上与肝癌细胞在缺氧微环境中生物学行为的改变密切相关。本项目首次阐明了缺氧微环境作为始动因素,通过上调TAMs关键免疫受体TREM-1,高表达抑制性配体PD-L1,同时招募FOXP3+Tregs介导肝癌抑制性免疫微环境的形成。TREM-1+TAMs有望成为治 疗肝癌潜在靶点指导临床治疗策略。 |
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