【原】CRISPR/Cas9 基因敲除多克隆细胞株

基因编辑就是对DNA序列进行删除、替换、或者插入外源序列，产生可遗传的改变的遗传操作技术。与随机突变相比，基因编辑实现了定向改变基因组成和结构，具有高效、可控的特点。

DNA水平的遗传操作技术一直是科学家梦寐以求的工具。从最初的同源重组到现在能够实现基因编辑的CRISPR/Cas系统已经经历了几代的发展。

CRISPR/Cas9是利用单链sgRNA通过碱基互补配对靶向基因位点，随后Cas9 核酸内切酶结合到与 sgRNA 形成双链的基因区域进行切割。切割形成的双链 DNA断裂将在体内被两种修复机制修复，第一种机制是非同源末端连接NHEJ（主导性修复机制），这种修复将产生短的核酸插入或删除从而导致基因移码突变；第二种方式是同源重组HR，在供体同源序列存在的情况下，可定向插入基因、蛋白标签和调控性元件（比如调节基因表达水平的序列）。

CRISPR/Cas9通过高效诱发以上修复机制从而实现基因组编辑的目的。