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一、成果短讯： 2018年9月17日，华盛顿大学医学院Malachi Griffith的团队在国际期刊NATURE COMMUNICATIONS 发表了题为“ Recurrent WNT pathway alterations are frequent in relapsed small cell lung cancer”的研究成果，报道了复发性小细胞肺癌中经常发生WNT途径改变的研究结果。 二、内容简介： 肺癌死亡率较高的癌症。近13％的肺癌患者被诊断为小细胞肺癌（SCLC）。SCLC是一种高度侵袭性的恶性肿瘤，其特征在于倍增时间短和转移时间早。几乎所有患有小细胞肺癌（SCLC）的患者最终都会因化学耐药性疾病而复发。尽管新诊断的SCLC患者通常对铂双联化疗的初始治疗有显着反应，但大多数患者在SCLC复发时病情迅速恶化，对进一步治疗有抗性。SCLC患者的中位生存期约为7个月，在过去的几十年中，驱动SCLC化学抗性的分子机制尚不清楚，由于缺乏复发性疾病患者的有效治疗选择，SCLC的死亡率高的情况没有得到改善。因此，了解治疗耐药的分子基础和识别治疗的弱点是改善复发性SCLC患者预后的必要条件。 此实验采集了12名患者在诊断和复发时采集的成对SCLC肿瘤样本的全外显子组测序，以及来自另外18名患者的未配对复发样本。多个体细胞拷贝数改变，在复发样品中包括ABCC1的增加和MYCL，MSH2和MSH6的缺失是可识别的。复发样本还表现出WNT信号转导调节因子的复发突变和杂合性缺失，包括CHD8和APC。RNA测序数据的分析显示复发样品中ASCL1-低表达亚型和WNT活化的富集。通过APC敲低对化疗敏感的人SCLC细胞系中WNT信号传导的激活诱导化疗耐药。另外，体外衍生的化学抗性细胞系表现出增加的WNT活性。综上所述，结果表明WNT信号激活可以作为复发SCLC中化疗抗性的机制之一。 三、实验结果： 图1 复发性SCLC中显着突变的基因。突变负荷（突变/百万碱基对）显示在x轴上（顶部），并且基因的群组突变百分比显示在y轴（左）上。在复发的SCLC中，显示的基因与背景突变率相比有显着性差异(FDR<0.1)。每列代表一个单独的样本（在底部列出）。患者 - 基因交叉网格的着色表示突变类型（顶部图例，中心图）和肿瘤部位（底部图例，底部图）。样品基因方块上的黑点表示该样品中该基因的杂合性缺失（LoH）。TN治疗初治，R复发，LN淋巴结，AG肾上腺，LU肺，BR乳腺，KI肾，LI肝 图2 复发的人SCLC样品富含ASCL1-低亚型并显示较高水平的WNT活性。a将复发的SCLC分类为ASCL1-高（左），NEUROD1-高（右）和ASCL1和NEUROD1-低（双阴性;中心）表达子类型。总体而言，与其他研究中测序的未接受治疗的样本（50％对18％; p = 0.01，Fisher精确检验）相比，我们的复发样本群体富含ASCL1低样本。小提琴图显示复发样品和初治SCLC样品之间的ssGSEA浓度的差异，使用来自Lin等人的c APC上调靶标和d CTNB 1致癌信号，用于b ASCL1和WNT途径激活 图3 ASCL1和MYCL在化疗后人SCLC组织和化疗耐药细胞系中下调。a化疗前（前）和化疗后（后）SCLC患者样品的序列表，用ASCL1抗体染色。b ASCL1阳性染色（棕色）和阴性染色（蓝色）的代表性IHC。比例尺代表20微米。c来自生物复制品中的配对化疗初始和抗性患者SCLC细胞系的指定基因（ASCL1，MYCL）的RNA表达（计数），并使用非配对t-检验进行比较。H1048 NCI-H1048，P亲本细胞，CR顺铂耐药，ECR依托泊苷和顺铂耐药，* p <0.05，NS无显着性 图4 APC的丧失诱导人SCLC细胞系中的化疗抗性。a左：敲低APC在H1694细胞与两种不同的shAPC构建体（shAPC＃1和2 shAPC＃）; 右：通过这些细胞中AXIN2上调和TOPFlash报道活性（信号倍数变化）测量的WNT信号传导的激活。对照细胞表达具有乱序靶序列（shScr）的shRNA。通过定量PCR（qPCR）测量APC和AXIN2 mRNA水平。表示对照细胞的倍数变化，并使用非配对t检验比较了值。每个实验以生物学一式三份进行（对于shAPC＃2的TOPFlash测定结果显示n = 5次实验）。b72小时处理后依托泊苷存活的H1694细胞的百分比。c左：与对照细胞相比，H1694细胞中APC敲低后依托泊苷IC50的倍数变化，右：APC或GFP（对照）过表达后APC敲低（shAPC＃2）细胞中依托泊苷IC50的倍数变化。使用配对t检验比较IC 50值。d 测序员测定的结果证明在HSP sgAPC细胞中CRISPR-Cas9引导的缺失后APC中的基因组改变（黑条表示的切割产物）和APC中通过APC sgRNA位点的靶向测序鉴定的框内缺失。e 通过免疫印迹qPCR和CTNNB1蛋白水平通过AXIN2 mRNA水平测量H82 sgAPC细胞中的WNT活化。肌动蛋白用作CTNNB1的上样对照。f在CRISPR引导的APC（sgAPC）或对照序列（sgControl）缺失后，用依托泊苷治疗后存活的H82细胞的百分比（n = 2个实验）。除非另有说明，否则实验以生物学一式三份进行。IC50抑制浓度50，GFP绿色荧光蛋白，* p <0.05，** p <0.01，**** p <0.0001，NS无显着性。Bp碱基对，Del缺失，AA氨基酸，H1694 NCI-H1694，H82 NCI-H82 四、原文学习：
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