【原】Cpf1完全性基因敲除小鼠模型介绍

CRISPR-Cpf1系统，，又叫Cas12a，是一类新型的CRISPR-Cas基因编辑工具，它扩大了基因编辑靶位点的选择范围，同时几乎没有脱靶效应。与CRISPR／Cas9基因编辑系统相比，CRISPR／Cpf1基因编辑系统拥有几大优势：

（1）Cpf1只需一个协助RNA分子。Cas9需要2个RNA分子协助。

（2）Cpf1酶分子量比Cas9小，进入细胞更容易，编辑成功率高；

（3）Cpf1系统的识别序列不同，基因编辑效果更好；

（4）Cpf1剪切位置与Cas9不同，选择余地更大：

（5）产生黏性末端，便于新DNA序列插入。

CRISPR/Cas9( Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 是一种由gRNA介导Cas9核酸酶特异靶向到靶位点，从而对目的基因进行编辑的技术。CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击演化而来的获得性免疫防御机制。CRISPR利用RNA与DNA杂交的原理，通过合成一个与特定DNA互补的gRNA，将Cas9靶向到靶位点，并进行切割产生DNA双链损伤。这种DNA双链断裂可以提高这个特定位点的重组效率，从而可以利用细胞的同源重组和非同源末端结合机制来进行基因组的编辑，如基因的敲入、敲除和定点突变。

细胞质注射法获取F0转基因小鼠

   

制备流程 　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 Cas9的结构

Cpf1完全性基因敲除小鼠应用

·简化了流程，缩短了制作周期，降低了成本

·可以制作多个基因同时敲除的动物

·可以制作不同种属的基因敲除动物.如猪、牛、斑马鱼