【原】TIGIT人源化小鼠模型构建

免疫检查点: 

免疫检查点是在免疫细胞上表达，能调节免疫细胞免疫反应的抑制性信号的一系列分子。众所周知肿瘤细胞便可以利用PD-1/PD-L1检查点逃避T细胞的杀伤，默沙东的PD-1抗体药物Keytruda（Pembrolizumab）和百时美施贵宝的Opdivo（Nivolumab）获批上市以来，短短几年拯救了数以万计的肿瘤患者。随着研究的深入，越来越多的免疫检查点被发现，TIGIT（T cell immunoglobulin and ITIM domain）是一种主要在T和NK细胞上表达的免疫检查点蛋白，CD226是抗病毒和抗肿瘤反应中重要的共激活因子，TIGIT通过与CD226竞争性结合肿瘤细胞上的骨髓灰质炎病毒受体PVR（CD155）从而达到抑制免疫激活的目的。因此，体外阻断TIGIT 后能增强 NK 和 T 细胞的活化，颗粒酶的释放和细胞因子 IFN-γ的分泌。小鼠肿瘤模型中，体内单独注射 TIGIT 抗体能显著减缓CT26（结肠癌）、4T1（乳腺癌）和B16/F10（黑色素瘤）的增长与转移显著减缓；联合 Flt3L 治疗后，小鼠基本不形成肿瘤，生存率也显著增加。

BALB/c小鼠是肿瘤研究中最常用的实验动物，其可接种的实体瘤类型比C57BL/6背景更多。

品系策略

图1  TIGIT人源化策略

TIGIT人源化小鼠采取原位替换策略将鼠源TIGIT胞外区蛋白全部人源化，但保留小鼠的胞内传导部分，可有效结合人的TIGIT抗体的同时又不会破坏原有的内部信号体系，确保准确筛选可推向临床的TIGIT人源抗体药物。

体内药效实验数据

图2  BALB/c-hPD1/hTIGIT与B6-hPD1/hTIGIT的体内药效对比试验（Tiragolumab analogue）

将对数生长期的结肠癌细胞CT26与MC38分别对应接种至6周龄 BALB/c-hPD1/hTIGIT与B6-hPD1/hTIGIT雌鼠皮下。待肿瘤生长至平均体积约100mm³时分为4组（BALB/c-hPD1/hTIGIT对照组、BALB/c-hPD1/hTIGIT给药anti-hTIGIT组和B6-hPD1/hTIGIT对照组、B6-hPD1/hTIGIT给药anti-hTIGIT抗体组，每组6只）。每周给药2次，共给药6次后测定肿瘤体积（图A：BALB/c-hPD1/hTIGIT；图B：B6-hPD1/hTIGIT）。结果显示：BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠接种CT26肿瘤后，使用anti-hTIGIT抗体治疗显示出良好的抗肿瘤效果（TGI=79.0%）；而B6-hPD1/hTIGIT小鼠接种MC38肿瘤后，使用anti-hTIGIT抗体治疗，未见肿瘤抑制效果。

结论：与接种MC38细胞的B6-hPD1/hTIGIT小鼠模型相比，抗人TIGIT抗体在接种CT26细胞的BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型体内药效更显著，BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型是评估抗人TIGIT药效的理想模型。