【原】转录抑制技术原理

转录抑制概述

CRISPR/Cas9系统是一种由RNA引导Cas9蛋白对靶基因进行修饰的技术。将Cas9中两个核酸酶结构域突变，就会使Cas9蛋白失去对DNA的切割活性，但不影响其与DNA的结合能力，这种失去DNA切割活性的Cas9蛋白被命名为 Dead Cas9（dCas9） 。利用gRNA介导dCas9能够精确识别靶基因的特点，将在gRNA引导下的dCas9蛋白结合到启动子区或转录因子结合区，则可阻止 PolII或TF与DNA的结合，从而可以抑制内源基因的转录，若将dCas9/gRNA复合物结合在转录区域就可以阻止转录本的延伸，同样可以达到抑制基因表达的目的。若将dCas9与具有转录抑制结构域的KRAB蛋白融合，获得的dCas9-KRAB具有更强的抑制效果，具有转录抑制活性的CRISPR-dCas9系统，简称CRISPRi系统。

CRISPRi系统是在DNA水平实现基因的转录抑制，而RNAi技术主要在转录后水平或翻译水平抑制基因的表达，因此CRISPRi可以作为RNAi技术的补充手段抑制基因的表达。同时CRISPRi亦可以抑制lncRNA、miRNA、反义RNA、核内RNA、RNA聚合酶等，较RNAi应用更为广泛。

转录抑制技术原理

CRISPR/Cas9系统转录抑制原理：dCas9与转录抑制域KRAB融合，表达的融合蛋白在gRNA介导下结合到启动子区，并通过KRAB抑制PolII与启动子的结合，从而抑制基因的转录。