【原】慢病毒滴度怎么检测？

CAR-T技术已经在癌症治疗中显示出广阔的发展前景，这种方法正在引发癌症免疫治疗的 革命性转变。所谓CAR-T，即使用经遗传修饰的原代T细胞来表达嵌合抗原受体（CAR）基因，通过使用质粒转染，mRNA、慢病毒或逆转录病毒将CAR转导到T细胞中稳定表达以构建CAR-T细胞，回输到人体后靶向识别杀伤肿瘤细胞[1]。

到目前为止，全球已经有五款针对血液性恶性肿瘤的自体型CAR-T上市，他们都是通过慢病毒或逆转录病毒转导的方法将目的基因转导进T细胞稳定表达，慢病毒对T细胞的转导效率是CAR-T技术的关键性步骤。

慢病毒属于逆转录病毒科，为RNA病毒，包括人免疫缺陷病毒（HIV）和猴免疫缺陷病毒（SIV）等。如今，LV技术已成为在体内外将外源基因传递到各种类型细胞中的最有效工具之一[2-5]。慢病毒转导基因的优点在于不仅能够感染多种分裂和非分裂细胞，还可以高效的将目的基因整合到宿主基因组并长期稳定表达[6]。

其中,人原代T细胞的高效转导仍然具有挑战性，并且实现有效基因转导的方法 通常昂贵且耗时[8]。为了建立高效稳定的制备高滴度病毒载体的方法及T细胞的高效转导方法，本文主要介绍慢病毒滴度测定的各种方法。常用的检测方法有免疫染色法、流式细胞术法、荧光定量PCR法、p24 蛋白酶联免疫法（ELISA）等。