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转录组讲师带你读文献-使用siRNA干扰LINC00152前后看结直肠癌表达量差异

 健明 2021-07-14

我在我在04-转录组笔记推文任务列表(半年期)里面安排了6个经典综述和10篇转录组应用文献给大家,可惜愿意沉下心了认真苦学的并不多。(https://share./doc/14uneHKvPg)

所以安排转录组讲师给大家做一下领读:

下面是转录组讲师的投稿

Date:2020-09-11

Author:jzhang

文章信息

标题:Targeting YAP1/LINC00152/FSCN1 Signaling Axis Prevents the Progression of Colorectal Cancer

标题:靶向YAP1/LINC00152/FSCN1信号轴可防止结直肠癌的进展

作者:Jian Ma,中南大学

杂志:Adv Sci (Weinh)(IF15.84),Published online: December 5, 2019

文章数据

https://www.ncbi.nlm./geo/query/acc.cgi?acc=GSE132519

RNA测序:四个直肠癌HCT116细胞系,测序平台HiSeq X Ten

  • 两个生物学重复non-targeting siRNA对照
  • 两个生物学重复LINC00152 siRNA实验
GSM3872544 Human colon cancer cell line HCT116 was transfected with a control non-targeting siRNA, biological rep 1
GSM3872545 Human colon cancer cell line HCT116 was transfected with a control non-targeting siRNA, biological rep 2
GSM3872546 Human colon cancer cell line HCT116 was transfected with LINC00152 siRNA, biological rep 1
GSM3872547 Human colon cancer cell line HCT116 was transfected with LINC00152 siRNA, biological rep 2

主要的分析是:

  • 差异表达基因的层次聚类:Hierarchical cluster analysis of differently expressed genes was performed to explore genes expression pattern

  • 差异表达分析:DESeq,estimateSizeFactors和nbinomTest函数

主要结果

1.yap1相关的LINC00152在人类CRC组织中高表达

首先使用siRNA处理的YAP1沉默表达细胞系和对照组细胞系的lncRNA表达谱(GSE92335),以此找到YAP1相关的lncRNA。随后在GEO数据库中验证(GSE41328 and GSE9348)。

转录组的标准分析,比较容易复现,基本上看我六年前的表达芯片的公共数据库挖掘系列推文即可;

找到了一个lncRNA LINC00152,具体表现为:

  • YAP1沉默的细胞系中显著低表达(GSE92335)
  • 在CRC数据集中显著高表达(GSE41328 and GSE9348)
  • 在TCGA和GEO数据集中CRC中显著高表达
  • YAP1 and LINC00152 表达正相关(RT-qPCR)
  • LINC00152的高表达与CRC的OS预后差相关
  • GSEA结果分析显示LINC00152高表达与YAP conserved signature” gene sets相关
  • LINC00152的表达在CRC样本中与靶基因CTGF正相关

以上结果的图:

2.YAP1转录调控CRC细胞中LIC00152的表达

此部分是为了确定YAP1与LIC00152之前的调控关系,结果如下:

  • YAP1的高表达或者抑制能够显著改变LIC00152表达水平
  • 在CRC中YAP1诱导的细胞增殖和肿瘤增长LIN00152是必须的
  • LINC00152启动子区域有两个转录因子TEAD1的结合位点
  • LINC00152的表达与TEAD1的表达正相关
  • 抑制YAP1 or TEAD1的表达就会抑制LINC00152的表达
  • TEAD1可以通过LINC00152的启动子一位点调控其表达

以上所有结果的结论就是YAP1可以在TEAD1的协助下调控LINC00152。

3 LINC00152是CRC细胞中的致癌lncRNA(文章数据主要应用的地方)

为了检测LINC00152是否与CRC进展相关,进行了4个细胞系的RNA-Seq测序(两个对照,两个靶向LINC00152的siRNA细胞系)。

LINC00152高表达的细胞系与低表达的相比,得到的差异表达基因数集的富集分析以及两个表型之间的GSEA分析表明LINC00152在CRC肿瘤发生和转移中起重要作用。

4.LINC00152通过与miR-185-3p和miR-632海绵作用于FSCN1
5.LINC00152-miR-185-3p/632-FSCN1轴促进CRC的肿瘤发生
6.LINC00152和FSCN1与CRC临床病理因素相关

个人总结

文章中主要使用RNA-Seq的地方就是对四个细胞系进行了测序(两个对照样本,两个沉默表达LINC00152的样本),为了研究LINC00152的表达变化引起了哪些mRNA的改变以及相应的功能。

LINC00152的抑制表达影响的通路有colorectal cancer signaling pathway, adherent junction, and apoptosis等。

GSEA结果:cell cycle, metastasis, cytoskeleton, and vascular endothelial growth factor A signaling。

文章中出现的一些markers

mesenchymal markers:Vimentin and β-catenin

G1-S transition-promoting markers:Cyclin D1 and CDK4

epithelial marker:E-cadherin

cell cycle G1-S transformation-inhibiting marker :p27

番外

文章中提到的siRNA和shRNA的区别和作用:http://www./method/siRNAs-and-shRNAs-Tools-for-Protein-Knockdown-by-Gene-Silencing.html

  • siRNA:小干扰RNA
  • shRNA:短发夹RNA

一图查看区别和作用

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