首先当然是对原始单细胞转录组表达量矩阵的降维聚类分群啦,这个在前面的例子:人人都能学会的单细胞聚类分群注释 ,我们演示了第一层次的分群。本文是植物学,但是原理是类似的,只不过不同细胞亚群的标记基因不一样。 然后你需要有背景知识才能做 拟时序分析 :文章是这样描述:focusing on endodermal cells, which have a known trajectory from undifferentiated, to state I (defined by the formation the Casparian strip), to state II (defined by the formation of a secondary cell wall made of suberin) (Andersen et al., 2015) 参考文献也列的明明白白,可以看到 发育顺序如下所示,从undifferentiated 到state I 然后到state II,这个背景知识决定了你要不要做拟时序分析,已经针对哪部分细胞亚群进行拟时序分析哦! 然后你需要提取指定单细胞亚群去运行拟时序分析,最经典的软件工具当然是monocle啦 ,代码超级简单,我们在《单细胞天地》公众号也多次分享过,而且三年前的我们一个单细胞公开课就是重点讲解这个代码:「生信技能树」使用Smart-seq2单细胞转录组数据探索小鼠性腺发育,链接是:https://www.bilibili.com/video/BV1454y1q77Z 运行结果如下所示: 可以看到,有两个发育分支,接下来就可以展现一下重要的基因,在拟时序的两个分支上面: 然后是拟时序的的各自特征基因的生物学功能数据库注释: 这一套图表的代码也是在「生信技能树」使用Smart-seq2单细胞转录组数据探索小鼠性腺发育,链接是:https://www.bilibili.com/video/BV1454y1q77Z ,学完了就能做出来哦! 总结一下这10个步骤:
拟时序分析是否可以对全部单细胞亚群呢?在发育生物学有这样的操作,比如:
如果你对单细胞数据分析还没有基础认知,可以看基础10讲: |
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