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一、涂 片标本（血膜）制作 （一）血涂片 ⑴玻片接血后，或将静脉血取一滴放在洁净的载玻片上，立即把两端平托在左手拇指与食指之间，右手取另一张洁净且边缘无破痕的载玻片，将一端斜立于左手玻片的血滴前方，两张玻片成30~45°角 ⑵右手将所持玻片稍向后拉，接触血滴使夹角处充满血液 ⑶将右手玻片略向左右晃动，血滴即充填于两玻片相接处的全长 ⑷将右手载玻片在左手载玻片面上推向前方，推片时保持两玻片短夹角 注意： ①血滴大小适宜； ②两玻片间的来角适宜； ③推片速度快慢合适，一次完成 （二）骨髓涂片 加5~10倍血清稀释骨髓，充分摇匀，取一滴在玻片上，制成涂片 二、血涂片染色 （一）试剂 1.Wright液： Wright粉0.1克放在研钵内，充分研磨，越细越好 逐滴加甲醇60毫升。边加边磨，直到数剂全部溶解 置棕色瓶密封保存，1周后可用，1个月后最佳 如吸收水分则染色效果差 Wright染料1克，甲醇（AR）600毫升，甘油15毫升 将染料全部倒入清洁干燥的研钵或乳钵中，加少量甲醇慢慢研磨，使染料充分溶解，再加少许甲醇混匀。如此重复多次，直到染料全部溶解、甲醇用完，最后加甘油密封保存。 2.Giemsa液 Giemsa粉0.8克，甘油50毫升，甲醇50毫升 将粉剂溶解于甲醇，在研钵中充分研磨，溶解后再加甘油，混合摇匀，置37°C温箱8~12小时，有棕色瓶密封保存。 稀释液：用时取5毫升，加1/15M磷酸盐缓冲液（pH6.4~6.8）50毫升。 3. Wright-Giemsa混合液: Wright液5毫升,Giemsa液1毫升,双蒸水或磷酸盐缓冲液(pH6.4~6.98)6毫升.不能有沉淀,否则重配 4.磷酸盐缓冲液： A(1/15M磷酸二氢钾):称磷酸二氢钠(KH2PO4分子量136.08)9.072克溶于蒸馏水1000毫升 B(1/15M磷酸氢二钠):称磷酸氢二钠(Na2HPO4 12H2O分子量358.14)23.876克溶于蒸馏水1000毫升 1/15M磷酸盐缓冲液 (Sörensen)
（二）Wright染色 ⑴将涂好的涂片左右两面用玻璃蜡笔划出染色区,防止染液在染色中溢出 ⑵涂片放在桌上或架上,滴加Wright液刚好 布满划线内的血膜,染色2~5分钟 ⑶加入等量磷酸盐缓冲液(pH7)或蒸馏水染色3~10分钟 ⑷倾去染液,以蒸馏水洗至血膜呈淡红色 ⑸甩干或直立晾干,中性树胶或香柏油或盖玻片封固,或不封片直接镜检 结果:红细胞橘红色；中性粒细胞颗粒 蓝紫至紫红色；嗜酸性粒细胞颗粒鲜红色至橘红色；嗜碱性粒细胞颗粒深蓝紫色;淋巴细胞核深蓝紫色,胞质天蓝色；单核细胞核蓝紫色,胞质灰蓝色 红细胞呈紫红色则染色时间过长；白细胞核呈天蓝色则染色时间过短 涂片在加染液后干涸会发生洗不掉的沉淀，应保持湿润 Wright液稀释应用pH7磷酸盐缓冲液或中性的蒸馏水 （三）Giemsa染色 ⑴涂片晾干，用甲醇或乙醚酒精（1：1）固定2~3分钟 ⑵入Giemsa稀释液染15~30分钟或更长（冬天37°C温箱） Giemsa染液： Giemsa染料1克，甘油66毫升，甲醛66毫升 将染料全部倒入盛有甘油的圆锥形烧瓶内，在56°C水浴锅内加热90~120分钟，使染料与甘油充分溶解混匀。加入预热60°C甲醇，充分摇匀，放棕色瓶内，室温下静置7天，过滤后使用。放得越久，染色效果越好 ⑶磷酸盐缓冲液(pH6.9-7.0)分色至着色分明清晰（镜检），晾干 ⑷若长期保存，可用香柏油或树胶封片。 结果：红细胞呈橘红色；中性粒细胞核蓝色，颗粒紫色；嗜酸性粒细胞核蓝色，颗粒红色；嗜碱性粒细胞核暗蓝色，颗粒暗紫红色 （四）Wright-Giemsa染色法 ⑴涂片用甲醇固定2~5分钟，晾干 ⑵Wright-Giemsa混合液染色5~10分钟 ⑶蒸馏水速洗,晾干 ⑷95%酒精分色10~30秒。可不分色，经脱水、透明、封片 ，直接镜检 ⑸无水酒精脱水10~30秒 ⑹二甲苯透明，香柏油或DPX封片 染色鲜艳、分明，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞颗粒最清晰 Wright-Giemsa复合染色法 ⑴血膜于Wright液染5分钟 ⑵加蒸馏水再染5分钟或直接用自来水冲洗 ⑶滴加Giemsa稀释液(原液1份加蒸馏水9份)染15分钟 ⑷空气中干燥 结果：红细胞颜色较浅， 白细胞较清楚 （五）Paulette-Vaner 伊红-Giemsa染色法 ⑴人血涂片空气中干燥，甲醇固定。 ⑵1%伊红Y（Eosin Y)水溶液5分钟，蒸馏水洗2分钟。 ⑶Giemsa稀释液30分钟。 稀释液：Giemsa原液30滴，0.71%磷酸氢二钠（无水）pH7.6 10毫升 ⑷蒸馏水洗3分钟，室温干燥。 ⑸木馏油-二甲苯脱水、二甲苯透明，树胶或DPX封固。 结果：白细胞核蓝色，中心体红色至深红色。 二、脱落细胞巴氏染色法 详见脱落细胞染色法。 三、Pappenhein染色法 ⑴组织涂片或切片用Helly液或Maximow液固定。 ⑵切片入May-Grünwald液（May-Grünwald伊红-美蓝粉0.25克溶于甲醇100毫升）10毫升用80毫升蒸馏水稀释于35℃染20分钟。 ⑶蒸馏水或Balint磷酸盐缓冲液15毫升加Giemsa液0.2毫升，于35℃染40分钟。 ⑷0.15%冰醋酸速洗，蒸馏水洗。 ⑸用滤纸吸干。 ⑹用丙酮无水酒精等量混合液脱水，二甲苯透明，香柏油封固。 Giemsa液可换成Panchrom染液：美蓝1克，甲苯胺蓝0.5克，天青Ⅰ 1 克，次甲基紫0.5克及伊红0.75克溶于甲醇250毫升，加甘油200毫升及丙酮50毫升。用时取0.15毫升加蒸馏水10毫升。 染后用0.1%苦味酸水溶液分色至切片呈红色，蒸馏水洗5分钟，脱水，透明，封固。 结果：细胞核紫红色；淋巴细胞细胞质淡蓝色；天青颗粒淡紫红色；中性颗粒棕色或蓝色中玫瑰红色；嗜酸性颗粒棕黄色至鲜红色；嗜碱性颗粒暗蓝色；红细胞玫瑰红色；肥大细胞颗粒紫色。
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