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一、浸蜡 新蜡含气体和少量水分，反复加温使气体和水分排去。蜡温比石蜡熔点高2~3℃ 软蜡：48~52℃ 硬蜡：56~62℃ 3~5毫米组织浸蜡2~3小时。肝、脾等组织减少浸蜡时间；脂肪组织及纤维较少的组织延长时间。 较大组织块先浸于二甲苯或苯-石蜡混合液（1：1）于40℃数小时再浸蜡。 方法： ①浸软蜡30~45分钟-->浸硬蜡45~60分钟-->包埋 ②浸软蜡30分钟-->硬蜡Ⅰ35分钟-->硬蜡Ⅱ25分钟-->包埋 ③浸软蜡Ⅰ10~15分钟-->软蜡Ⅱ10~15分钟-->硬蜡45~60分钟-->包埋 ④浸软蜡Ⅰ10~15分钟-->软蜡Ⅱ10~15分钟-->硬蜡Ⅰ20~30分钟-->硬蜡Ⅱ30~40分钟-->包埋 二、包埋 包埋蜡倒入包埋框（底模，模具比组织略大2~3毫米）内，快速将组织放入蜡液内，切面朝下，固定位置，冷却后凝固成蜡块 三、切片 主要仪器：切片机（Leica RM2145或Leica RM2245) 包埋框包埋的蜡块，用解剖刀修整成长方形或正方形，保留蜡边2~3毫米。 底模包埋的蜡块一般不用修整。 将蜡块夹在切片机的标本夹，拧紧螺旋 安装刀片。 调到TRIP模式（修切），设置修切厚度。松开切片机锁。 根据蜡块表面与刀片的距离，松开底部的锁，内眼观察，慢慢移至两者相距很近。 打开旋转手轮，进入快进模式↑或↑↑。使切面与刀片接触（稍紧），如术过，使用↓或↓↓。不能碰到刀片。 旋转手轮，切下组织，使切面表面的组织全部能切到。 转到SECT模式（切片），均匀切片，蜡片一片片连在一起称蜡带。 用毛笔将蜡带移到切片板上。 四、展片（粘片） 主要仪器：摊烤片机、电热恒温培养箱 主要是水（酒精）捞法 用解剖刀或手术刀片将蜡带分离或切成小片。 用镊子夹入冷水中，亮面朝下。 待组织基本平展，移入加热至45~60℃热水中，蜡片展开。 用镊子将未展平的部分拉开，使组织完全展开展平。 立干水份，放入烤片机（60~70℃ 1~2小时）或37~40℃温箱（24~48小时）烤干 附：硬蜡切片制作仪器 磁力搅拌器———配制难溶试剂 电热恒温培养箱——烤片电热恒温干燥箱——玻璃器皿或手术器械烘干、切片染色加温 Leica RM2145或2245切片机——蜡块切片 摊烤片机————蜡片展片 Leica EG1150包埋机——————组织块包埋 机械式微波炉————冬天脱水、透明、染色加热 |
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