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相较于PCR等分子生物学实验，高通量测序目前仍是相对繁琐复杂的一种生物学方法，且其后期结果与大数据结合的特点，更增加了开展高通量测序工作的门槛。 如何尽可能的保障测序工作的成功呢？质量控制很关键！ 如图所示，整个测序的工作流程可以简单划分为4个阶段，相应的也对应了4个质控点。每个点都需要我们严格把关，错失一个，都会极大的影响测序结果。 一、质控点1：样本提取质控 该环节实现了从样本到核酸（DNA或RNA）的转换，质控的目标为核酸的浓度和纯度。 采用的方法一般为凝胶电泳、Qubit、微量分光光度计等。 参考文档：Qubit-文库构建兵器谱之“孔雀翎” 二、质控点2：文库构建质控 该环节实现了从核酸到文库的转换。文库即可被测序仪读取的，符合测序仪要求加工后的核酸片段。 此步质控的目标为 文库的浓度 以及 文库的片段大小 采用的方法一般为RT-PCR、Qubit、Agilent2100等 三、质控点3：序列质控 该环节实现了从文库到序列的转换，换言之此步是测序仪的实际运行阶段，通过文库上机、信号转换等获得ATCG序列信息。 此步质控的目标为下机数据的数据量和质量（如Q30指标）等 采用的方法一般为生物信息学方法，常用软件为Fastqc 参考文档：FastQC 你需要知道的在这里！ 四、质控点4：报告质控 该环节实现了从测序序列到报告的转换，简而言之就是最终目标，回答整个样本中具体的情况，如到底为何菌？样本中含有何种病原？ 此步质控的目标为降低假阳性和假阴性。 采用的方法为多种生物信息学方法相结合，互相验证，同时报告需有专业人员审核。 长按关注 公众号名称：微微悦明 科学的乐趣是获得新知识的喜悦~ 高通量测序、大数据病原微生物检测和监测健康大数据行业资讯记录与分享 |
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