【原】细胞增殖检测的常见方法

细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础，是生物体的重要生命特征。检测细胞在培养基或组织中的生长速率，对于细胞生长和分化研究至关重要。在药物开发过程中也常被用于评估药物的毒性和对癌细胞生长的抑制情况。细胞增殖检测通常是基于DNA含量或细胞代谢实现的，主要的研究方向为对活细胞的代谢活性的检测（基于CCK-8、WST、XTT、MTT等）及对DNA合成的检测（基于BrdU、 EdU），可通过体内成像、微孔板或流式细胞术检测等多种技术进行细胞示踪。

以下是常见的三种方法：

使用四唑盐进行代谢活性检测

通过添加四咪唑盐到细胞中可进行线粒体内酶代谢活性的测定。活细胞能将四咪唑盐（如CCK-8、MTT、XTT、WST-1）还原成有色的甲瓒或甲瓒盐（Formazan），可通过分光光度计或酶标仪进行检测。

其中Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。具体是利用四唑盐——WST-8，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。

测定ATP水平检测细胞增殖

活细胞需要不断以ATP的形式输入自由能，因此通过检测ATP的增加水平可检测细胞增殖。例如sigma的ATP Bioluminescence Assay Kit HS II及ATP Bioluminescence Assay Kit CLS II)是通过经典的荧光素酶发光对ATP检测定量的试剂盒。前者主要应用于高灵敏度检测极低浓度ATP的实验，后者主要应用于当有持续信号产生而需要高重复性结果的实验。

DNA的合成的检测

DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件，故经常被用来进行细胞增殖、细胞活力及凋亡的检测。 BrdU及EdU，都是胸腺嘧啶的非放射性类似物，能掺入增殖细胞的DNA中，可通过对BrdU及EdU的检测，从而对DNA的合成量进行测定。

例如sigma，可通过Cell Proliferation ELISA,BrdU (比色法.)或Cell Proliferation ELISA, BrdU (发光法) 进行细胞群落中DNA合成测定（BrdU based）。优点是：实验结果同增殖细胞数目紧密相关，可一步完成细胞的温和固定和变性，操作方便稳定，不破坏细胞形态。5-Bromo-2´-dU Labeling/Detection Kit I（荧光法）或Kit II（AP）可使用试剂盒提供的BrdU单抗，以及酶或荧光偶联二抗，检测单细胞水平的DNA合成（BrdU based）。前者通过免疫荧光检测，后者通过荧光显微镜检测。优点是：使用核酸酶变性DNA，在不伤害细胞完整性的情况下使抗体结合BrdU。体内外均可进行标记，且可同时使用其他标记进行检测，操作安全简便。适用于贴壁或悬浮细胞，冰冻或福尔马林包埋组织切片。

EdU与BrdU检测法不同，EdU-Click 检测，如EdU-Click 594无需进行DNA变性来检测掺入的EdU，而是通过一次快速、高度特异性的点击反应，将EdU高效地掺入到新合成的DNA之中, 通过EdU与不同荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，从而确地反映细胞的增殖情况。这一类细胞增殖用荧光标记采用温和的点击实验方案，准确且兼容各种抗体实验方案，整个实验可在30分钟内完成，在结果的数据丰富程度方面，堪比多重分析方法。此外，该方法适用于培养的细胞或组织切片，可用流式细胞术分析检测EdU Flow Cytometry Kit 594）；可进行HCS分析或进行细胞裂解液微孔板检测EdU HTS Kit 594；也可适用于培养中的细胞，或通过注射方法进行活体实验的小动物样本，进行体内成像分析In Vivo EdU Click Kit 594、流式细胞检测或HCS高通量检测。(共有488、555、594、647四种荧光染料可选）。