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前言 自2009年以来，WFD一直在亚洲对虾养殖中时有发生，并严重影响了虾在池塘中生存。该疾病的主要特征：通常在养殖约50天后爆发，白色的粪便出现在料台或者水面上，并且导致虾生长迟缓，收成不好甚至是颗粒无收。  一、虾白便病（WFD），原因到底是什么？ 与WFD相关的虾肝胰脏和中肠的变化，揭露了虾肠道细菌与疾病具有很大的关系。有报道称，虾肝肠胞虫(EHP)、类似原生动物的小型簇虫，某些弧菌种，是虾爆发WFD的病原体。另据报告，在WFD暴发期间，溶解氧浓度低于每升3.0毫克、碱度低于80ppm的水质，虾的死亡率最高。然而，WFD的真正的病因虾塘仍然不确定。 肠道细菌的组成对虾的健康有很大的影响。通过移植病虾的肠道菌群，可以在健康虾体内引发WFD。随着虾的生长发育和饲料的增加，虾肠道内的细菌群落结构可能发生动态变化。而且池塘底部环境（包括底泥）也会影响虾的肠道细菌，因此同一养殖场虾的肠道细菌，也可能有所不同。然而，在WFD疾病爆发前、爆发期间，水体参数、肠道细菌、粪便细菌和池塘水体细菌群落之间，是如何产生相互作用，这一类研究很少。 因此，我们认为需要更广泛的了解细菌群落动态信息，包括池塘水中的致病菌，以及与患病和非患病虾的关系，才能更好的了解、预防、治疗WFD疾病。在本研究当中，我们提出一个假设，水质的突然变化首先会影响池塘水中的细菌群落，进而影响虾的生理和肠道细菌。 二、研究设计： 该研究在印度尼西亚中爪哇省的一家养殖场进行，采用四个池塘进行实验，分别为：P1（对照组，健康虾），P2、P3、P4（实验组，在养殖期间让其感染上WFD），所有实验组都采用同样一家孵化场的无特定病原体虾苗，养殖密度、水质参数尽量保持一致。 为了进行细菌群落分析，从每个实验组（P2、P3、P4）的池塘中，收集了10条感染疾病的虾，同样在对照组（P1）的料台中，收集了10条健康虾，并立即将其放入冷藏库，然后将这些虾在实验室中解剖以收集其全部肠道，并将所有样品保存在负20摄氏度下，再进行DNA提取和各种分析。 三、研究结果与讨论： 1、为了更好地了解南美白养殖的WFD暴发情况，我们测量了池塘的水质并分析了细菌群落动态。根据对池塘中白色粪便数量的估计，我们将WFD疾病分为两个阶段：开始发病(早期症状)，以P3和P4为代表，白色粪便数量较少；发病中后期以P2为代表，白色粪便数量较多。 我们的研究结果表明，当pH值在7.71-7.84时容易爆发WFD，细菌种类为交替单胞菌和弧菌占主导地位；该病的严重程度，还与虾粪中的弓形杆菌，发光杆菌，假单胞菌和弧菌比例有关。这些机会致病性细菌分别占疾病暴发早期和中后期阶段样本的60％和80％，并表现出很高的共现率。 2、微生物活动，包括有机物降解、呼吸和硝化过程以及二氧化碳的积累，将导致pH值和碱度的下降，这些是在病虾池塘中观察到的状态，也就是说pH值和碱度的下降可以引发WFD。相比之下，通过定期添加石灰和活性硅酸盐的外部干预，可以缓冲pH值或者碱度下降的水平，这一点我们可以在健康虾的池塘中观察到。 3、我们的研究还表明，环境突变，如，pH值(低于8)和溶解氧(低于6mg/L)的突然下降，以及在P2-P4中观察到的无机营养物的增加，可能会影响虾肠道内和水体中的细菌群落。环境突变引起虾体内应激，进而导致肠道细菌群落发生变化，导致机会致病菌，如发光杆菌，假单胞菌和弧菌在白便虾中占主导地位。 4、我们观察到从有益细菌为主的肠道群落，逐渐转移到病原体占主导的肠道群落，这种现象也符合早期症状，向中后期症状发展的现象相吻合，说明肠道细菌群落的变化可能与虾病的严重程度密切相关。因此，本文前面的假设得到研究的支持，即：虾肠道细菌的变化与疾病严重程度的变化。是存在互相关系的，表明虾是从健康状态转变为患病状态。 5、根据我们的分析结果，较低的pH值改变了异养菌的生长速度，导致机会性、潜在致病性细菌，如发光杆菌，假单胞菌和弧菌在池塘水中占据优势。同时，由于水的流动和启动增氧机，虾的粪便很容易在水体中分解(12小时内可达27%)。 粪便的分解有利于细菌的分散，也有利于更多的病原细菌掺入颗粒物质中，这样会加速疾病在虾中的传播，因为健康的虾可能会食用富含病原体的颗粒，并会引发疾病。因此，在这种情况下，粪便细菌不仅会影响养殖水的细菌丰度，结构和功能，还会对虾的健康造成影响。 6、调节水质参数，特别是将pH值调节至8以上，虾可以从WFD中慢慢恢复。这意味着只要水体当中细菌群落有能力恢复，那么疾病还是有治愈的可能。但是，需要注意的是，如果虾长时间在水质恶化，以及病原体比例高的情况下生存，那么会增加疾病的严重性。并导致虾出现大量死亡。 7、在使用益生菌治疗虾WFD的研究结果表明，将益生菌添加到水体当中，水体经过稀释后，不再能检测到益生菌，说明益生菌在水体生长需要时间、条件，并不适合快速治愈疾病。因此，我们建议不要将益生菌撒入池塘水中，而应将它们添加到饲料颗粒中，然后由虾吃掉。这样，益生菌在虾肠中的定殖可能会更有效。  四、研究结论： 我们的研究结果表明，环境胁迫因素，特别是pH值降低、溶解氧降低，池塘水体中细菌群落发生变化，会引起影响虾的生理，进而导致肠道细菌群落的变化，并导致WFD的出现。此外，我们观察到了几种机会细菌类群，比如：弓形杆菌，交替单胞菌，海单胞菌属，发光杆菌和弧菌，可能导致虾爆发WFD疾病。 本文为《一号水产》独家稿件！ |
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