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对虾养殖的集约化程度越高，疾病爆发的可能性就越大。这是由于对虾生活在各种压力条件下，使它们极易感染弧菌病等疾病。   一、对虾和疾病，存在什么关系？ 当水质不佳时，虾类对各种病原体的易感性就会增加，导致较高的死亡率，最终造成养殖户的巨大经济损失。为了在养殖期间保持虾的健康，研究人员通过使用免疫刺激剂，开发了一系列有利于虾健康的饲料。其中，草药是一种很有前景的免疫刺激剂，因为它成本较低、效益较好，且对生态环境友好，副作用可以忽略不计，同时，它们可以提高虾类生长性能。 在常见的草药当中，辣木（Moringa oleifera）因其营养价值而广为人知。辣木本身蕴含了纤维、蛋白质、维生素、矿物质和脂质，还具有许多药理性质，如：抗癌，抗糖尿病药，抗炎剂，抗氧化剂，抗菌，这些特性与酚酸、黄酮类等生物活性化合物的存在有关。 之前一些研究表明，将辣木叶提取物添加到水生动物动物的饲料中，可以改善动物的生长和生理，上调免疫相关基因功能。 1、在罗氏沼虾饲料当中，添加0.5%辣木提取物可提高免疫相关基因的表达水平，提高对鳗弧菌的抗性，以及罗氏沼虾的生长性能。 2、饲料中添加1.5%~ 5%辣木提取物，可有效提高罗非鱼的免疫力，以及控制疾病感染的能力。 辣木提取物对南美白对虾血细胞安全的浓度，可以通过活力测定来确定。虾的免疫系统需要血细胞（用于包裹、结节和吞噬）、几种血浆成分（抗菌肽、组蛋白、溶酶体酶、脂多糖、葡聚糖结合蛋白和识别分子）和多聚体系统（凝血蛋白级联反应，酚氧化酶原系统），其中免疫细胞的功能是通过免疫基因的表达来调节的。辣木提取物对免疫机制的刺激，有望提高南美白对虾对抗溶藻弧菌的能力。然而，辣木的应用不应阻碍其生长，但有些草药可能在提高免疫力的同时抑制其生长。 虽然已经有一些研究确定了辣木提取物对鱼和虾的影响；然而，关于辣木提取物作为南美白对虾体外和体内免疫刺激剂影响的研究不足。因此，本研究的目的是在体外和体内研究辣木叶提取物对血细胞活性、酚氧化酶活性、吞噬能力和超氧阴离子生成的影响。此外，本研究还分析了辣木提取物对免疫相关基因表达、对溶藻弧菌的抗性和生长性能的影响。 二、研究设计 1、辣木提取物的制备 辣木提取物，主要取得辣木叶制作而成。先将干燥的辣木叶片磨成细粉，与热蒸馏水(98℃)按1：9的比例混合，然后在室温下放置24小时。得到的溶液用薄纱布和滤纸进行过滤。将液体在-80°C冷冻，并在干燥机中干燥3天，得到提取物。 2、南美白对虾 南美白来自台湾海洋大学 (NTOU) 水生动物中心，先让它们在28°C±1°C的温度和32±1ppt的盐度下的圆形池塘中适应两周。在实验期间，每天给虾喂食3次商业饲料，两周以后，仅选择外观健康的虾（无疾病迹象、正常摄食行为、坚硬的外壳）用于后续实验。 3、饲料配制 研究一共配制4组饲料，第一组是对照组饲料（ME0），不添加辣木提取物，其他三组分别在1kg的饲料当中添加1.25克、2.5克和5.0克的辣木提取物，后面三组饲料分别命名为ME1.25、ME2.5和ME5.0。 4、研究设计 研究的前60天，南美白对虾分别投喂四组饲料，60以后计算南美白对虾的生长性能。接下来，再进行溶藻弧菌挑战试验，分别从四组虾中随机挑选150尾南美白对虾，并让其感染溶藻弧菌，最终确定各组虾的存活率。 三、研究的结果和讨论 1、研究的结果表明，在1kg饲料当中使用2.5克辣木提取物，南美白对虾血细胞的活力与对照组相同，然而，在剂量超过2.5克的情况下，血细胞的活力往往会降低。因此，辣木提取物在1kg饲料中2.5克（以下）时对血细胞是安全的。 2、体外测定表明，辣木提取物在1克至2.5克的剂量下增加了血细胞活性、酚氧化酶活性、吞噬能力和超氧阴离子生成。但是当辣木提取物增加到5克时，这些免疫参数也不会增加，这些结果表明辣木提取物可用作南美白对虾的免疫刺激剂。 3、高数量的循环血细胞对虾的免疫系统至关重要。所有辣木提取物组的虾，都显示出较高的对抗弧菌感染的能力。我们都知道吞噬作用受到ProPO系统的影响，PO是一种粘性蛋白，附着在病原体的各种表面上，可以增强吞噬作用。在吞噬过程中，会产生许多对抗微生物物质，例如：超氧阴离子。因此，辣木提取物可以增强白对虾对弧菌引起疾病的抗性。 4、在本研究当中，1kg饲料中添加2.5克辣木叶提取物，南美白对虾能够获得更好的生长性能，以及更高效的饲料利用率。然而，另一项研究报告称，南美白对虾投喂（1kg饲料中添加1克辣木叶提取物）的饲料，对南美白对虾的生长性能有积极影响。 5、在溶藻弧菌挑战试验中，ME2.5组（1kg饲料添加2.5克辣木叶提取物）的南美白存活率最高，其次是ME5.0。这个表明，辣木叶提取物能够提高南美白对虾相关的免疫参数，降低溶藻弧菌的影响。 四、研究结论 总之，本研究证实了饲料当中添加辣木提取物，增强了南美白THC、PO、PR、PI 和超氧阴离子的生成。此外，辣木提取物还能上调proPO系统、抗菌肽、超氧化物歧化酶和凝血蛋白的基因表达。另外，1kg饲料中添加2.5克辣木叶提取物，最有利于改善南美白对虾的非特异性免疫反应和生长性能。 |
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