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细胞凋亡检测研究:Annexin V如何解决?

 艾美捷科技 2022-02-19

在生物学研究过程中常常需要检测细胞凋亡情况。目前至少有十数种检测细胞凋亡的方法,大致可分为基于细胞形态、生物学功能和生化标记三大类。那接下来就来说一下Annexin V-细胞凋亡检测方法。

Annexin V凋亡检测原理:

当细胞发生凋亡时,会首先出现细胞膜结构的改变。其中在正常情况下,细胞膜中磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)通常存在于内表面,而在细胞发生凋亡的过程中,PS会外翻、转移到质膜的外层。因此可以通过该现象,利用检测磷脂酰丝氨酸的方法,检验细胞是否发生凋亡。

Annexin V是膜联蛋白的一种,其功能目前尚不明确,但Annexin V已知可在钙离子存在的情况下与磷脂酰丝氨酸高亲和力结合。利用该特点,使用荧光或其他偶联标记标记的Annexin V即可检测细胞膜表面暴露的PS。

由于细胞在晚期凋亡或死亡后细胞膜结构破坏,此时Annexin V可以随意进出细胞,染色呈阳性,这就造成与我们关注的早期凋亡事件无法区分。而在细胞早期凋亡时,细胞膜完整性尚未破坏,此时非浸透性荧光染料如7-AAD或PI无法进入细胞,染色呈阴性。因此结合Annexin V和7-AAD/PI染色,经流式细胞仪和荧光显微镜检测,即可区分早期凋亡和晚期凋亡/死亡细胞。

Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合,是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。

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Annexin V组成成分:

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