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影响因子：12.531

本文通过研究40名原发性和同步转移性siNETs患者与正常组织相比较，利用多参数流式细胞仪、免疫组化等检测免疫检查点及T细胞浸润的相对丰度和分布。此外，还评估了肿瘤突变负荷（TMB），并与免疫浸润相关联。

研究背景：

适应性免疫反应是通过T细胞上的T细胞受体(TCR)抗原识别而启动的，但最终决定免疫反应是免疫检查点信号。免疫检查点分子的失调会导致肿瘤逃避免疫监视，该方法已被有效用于靶向检查点分子程序性细胞死亡-1(PD-1)及其配体程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)。  

神经内分泌肿瘤是一组不同的肿瘤，最常见于胃肠道，胰腺和肺。它们在生物学、临床行为和预后方面的异质性显著。虽然已经有许多研究评估了siNETs中PD1或PD-L1的表达，但对siNET中免疫检查点谱的全面分析尚未报道。在本研究中，对40例siNET患者的免疫微环境进行了系统分析，为siNET的免疫治疗发展提供新的理论基础。

 

研究结果：

本研究收集了40名siNET患者的组织和血液。下表是siNET队列患者的临床病理特征。

一、对T细胞亚群的评估表明，在CD4eff、CD8和PBMC中，siNET的效应T细胞比调节性T细胞比例更低。

下图A：通过流式细胞术分析分离的淋巴细胞。结果表明，无论是原发还是转移，siNETs都有一个抑制性更强的免疫肿瘤微环境。

二、在siNETs中，单一免疫检查点分子在调节性T细胞上表达较高，而在PBMC中表达较低。

1、对于所有检查点分子，在正常组织、原发和转移性肿瘤和PBMCs中，Treg的表达水平显著高于效应T细胞(图1B；图S3)。

2、与PBMC和正常组织相比，肿瘤中CD8+细胞中PD-1和CTLA-4显著表达，而CD8+TIGIT在PBMC中显著升高。与其他组织类型相比，转移性肿瘤中CD4eff中TIM-3和TIGIT显著表达，而PBMC中PD-1和CTLA-4的表达显著降低。与其他组织类型相比，PBMC中Tregs的PD-1、TIM-3、OX-40和GITR的表达显著降低(图S3)。

3、PBMC的激活也有所不同，所有T细胞亚群上GzmB的表达和CD4eff上CD25的表达显著升高。CD8正常组织中的TIGIT在之前有SSA的患者中显著升高(图S5)。

三、与正常组织中的淋巴细胞相比，siNETs中的肿瘤浸润淋巴细胞表现出更佳的共表达表型。

为了进一步表征siNETs的免疫微环境，比较了CD8+和CD4effT细胞上多个检查点的表达，结果表明：

1、与CD8+和CD4effT细胞中其他组织类型相比，PBMC具有独特的共表达表型(图2A)，而正常组织和肿瘤之间的免疫景观的相似性一致。

2、CD8+和CD4eff聚类分析表明PBMC与其他组织类型有明显的不同（图2B）

3、每个FlowSOM CD8和CD4eff群体（蓝色）在每个组织亚型上的UMAP分布（橙色）。（图2C）

以上表明，在siNETs中，与其他组织和CD4eff相比，CD8+T细胞在转移性组织中受到更多的调控。

4、在一些实体肿瘤中，联合使用检查点抑制剂比单独使用更有效。

本文发现PD-1在siNETs的T细胞亚群中高表达，进一步分析它与其他359个检查点分子的共表达，以探索对联合治疗的可能。使用PD-1作为核心，发现PD-1/ICOSPD-1/CTLA-4可能是有效的途径（图3）。

四、对免疫情况的评估显示，这些肿瘤的T细胞浸润程度较差。

对病例进行IHC分析：siNET的图像显示了肿瘤内T细胞(下图A)或肿瘤周围T细胞(下图B)。T细胞计数显示，T细胞主要在肿瘤周围，而不是肿瘤内（下图C）。此外，与肿瘤内相比，肿瘤周围CD8/Treg比值明显更高，这表明不是肿瘤内T细胞较少，而肿瘤微环境中CD8/Treg比值低时收到更严重的调控(下图D)。

五、与TCGA队列中的其他肿瘤类型相比，siNET的TMB值较低。

本文证实了siNET患者的TMB值较低，TMB和CD8/Treg比值之间没有相关性（图S8)。并且将该数据集的突变负荷与TCGA队列进行了比较，发现确实较其他肿瘤类型低（图5）。

总结：本文研究发现效应性肿瘤浸润淋巴细胞在肿瘤微环境中的PD-1表达量高于其他周边组织。与正常组织相比，CD8+肿瘤浸润淋巴细胞对PD-1/ICOS和PD-1/CTLA-4的共同表达明显较高。IHC显示，大多数病例有较少的瘤内T细胞，但有较多的瘤周T细胞。最后，作者证实，与TCGA数据库中的其他肿瘤类型相比，siNETs的TMB较低，但没有发现TMB与CD8/Treg比率之间的相关性。综上所述，这些结果表明，将PD-1作为检查点免疫调节剂核心与其他检查点靶向分子（CTLA-4或ICOS）联合使用可增强免疫反应，治疗siNETs患者。