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Absin Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品详情
1. 基本属性
| 中文名称 | Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒 | | 英文名字 | Annexin V-FITC apoptosis assay kit | | 别名 | Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 | | 产品货号 | abs50001 | | 产品规格 | 25T,50T,100T | | 产品组份 | AnnexinV-FITC, 10×Binding Buffer, Propidium Iodide | | 保存建议 | 4℃保存6个月；避免反复冻融。 | | 产品说明书 |  |
2. 产品描述
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。。
3. 操作步骤
贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2+螯合，影响Annexin V的结合。
（1） 用去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer；
（2） 细胞收集：悬浮细胞收集：离心 5 分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（ 注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合），在室温中，2000rpm 离心 5～10 分钟，收集细胞；
（3） 细胞洗涤：用预冷 1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm 离心 5～10分钟，弃上清洗涤细胞；
（4） 加入 300μL 的 1×Binding Buffer 悬浮细胞；
（5） Annexin V-FITC 标记：加入 5μL 的 Annexin V-FITC 混匀后，避光，室温孵育 15 分钟；
（6） PI 标记：上机前 5 分钟再加入 5μL 的 PI 染色。
（7） 上机前，补加 200μL 的 1×Binding Buffer。
注意：每个反应体系建议细胞数为1×104至1×106个
4. 用法说明
（1） 使用前低速离心，以免液体积存管盖和管壁；
（2） 本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（3） PI（propidium iodide，溴化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（4） Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（5） 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在 4℃下操作，以免影响细胞状态。
（6） 在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留，有可能会影响实验结果。
（7） 为防止荧光衰变，宜在 1 小时内进行流式检测。
（8） PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC 染色，最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒部分文献展示
Editing flagellin derivatives for exploration of potent radioprotective agents Tong Shib, Jun Jiang, Meng Gao, Ronglin Ma, Xuejun Chen, Ruihua Zhang, Jianfu Xu, Weili Wang, Shujuan Xu, Xi Liu, Huizhen Zheng, Chen Wang, Liqin Li, Ruibin Li European Journal of Pharmacology. 2021 Sep 15 .
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